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摘 要
Abstract
第1章 综述
1.1 结核病病原学
1.2 结核病流行情况
1.3 结核病防治
1.4 结核分枝杆菌基因组分析
1.5 分枝杆菌细胞壁
1.6 脂肪酶
1.6.1 脂解酶概述
1.6.2 结核分枝杆菌中的脂解酶
第2章 引言
第3章 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 供试菌株、细胞和质粒
3.1.2 培养基
3.1.3 引物
3.1.4 主要试剂
3.1.5 主要溶液
3.1.6 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 LipU保守性及活性中心分析
3.2.2 Rv1076基因克隆
3.2.3 Rv1076蛋白表达
3.2.4 Rv1076蛋白纯化与复性
3.2.5 LipU酶活测定
3.2.6 最适底物测定
3.2.7 温度和pH值对酶活的影响
3.2.8 酶动力学参数测定
3.2.9 表面活性剂对LipU活性的影响
3.2.10 LipU活性位点验证
3.2.11 Rv1076在不同胁迫条件下的表达分析
3.2.12 Rv1076同源基因MSMEG_5271敲除
3.2.13 回补菌株构建
3.2.14 回补菌株鉴定
3.2.15 LipU对分枝杆菌生长的影响
3.2.16 rLipU诱导的细胞因子检测
3.2.17 3D模型构建
3.2.18 统计分析
第4章 结果与分析
4.1 Rv1076理化性质分析
4.2 Rv1076保守性分析
4.3 LipU蛋白二级结构分析
4.4 成功构建pET-28a-Rv1076重组质粒
4.5 LipU蛋白表达与纯化
4.6 LipU活性测定
4.7 LipU底物特异性分析
4.8 LipU的最适温度与pH及其稳定性分析
4.9 表面活性剂对LipU活性的影响
4.10 LipU动力学参数测定
4.11 LipU活性位点突变
4.12 LipU活性位点验证
4.13 LipU晶体结构分析
4.14 Rv1076在不同胁迫下的表达分析
4.15 Rv1076敲除与回补菌株构建
4.16 LipU有利于分枝杆菌存活
4.17 rLipU定位于细胞壁
4.18 rLipU重组蛋白促进细胞因子表达
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
英文缩写一览表
致 谢
硕士期间发表和撰写的文章
