声明
第1章 文献综述
1.1 泛素-蛋白酶体系统
1.1.1 泛素
1.1.2泛素化酶与泛素化
1.2 泛素连接酶
1.2.1 RING类E3连接酶及其研究进展
1.2.2 U-box类E3连接酶及其研究进展
1.2.3 HECT类E3连接酶及其研究进展
1.3 泛素连接酶参与植物光形态建成
1.4 棉花GhUPL7的研究基础
1.4.3 GhUPL7基因与GhAILP1基因在棉花中的表达具有一致性
第2章 引言
2.1立题依据
2.2技术路线
第3章 材料与方法
3.1 材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 菌株与载体
3.1.3 主要试剂
3.1.4 主要仪器
3.1.5 常用试剂配制
3.1.6 GUS染液配方
3.1.7 基本培养基
3.1.8拟南芥相关培养基
3.1.9 棉花遗传转化培养基
3.1.10 SDS-PAGE电泳所用缓冲液
3.1.11 Western blot检测所用缓冲液
3.1.12 植物蛋白提取缓冲液
3.2 方法
3.2.1 植物基因组RNA提取
3.2.2 大肠杆菌质粒提取
3.2.3 植物基因组DNA提取
3.2.4 cDNA反转录步骤
3.2.5 DNA片段的扩增、回收
3.2.6 农杆菌感受态的制备
3.2.7 农杆菌的转化
3.2.8 大肠杆菌的转化（热激法）
3.2.9 棉花遗传转化
3.2.10 GUS组织化学染色
3.2.11拟南芥遗传转化
3.2.12 拟南芥阳性植株的筛选
3.2.13 转基因棉花基因表达量分析
3.2.14 拟南芥花青素含量的测定
3.2.15 植物蛋白提取与定量
3.2.16 TAIL-PCR分析拟南芥T-DNA插入位点的侧翼序列
第4章 结果与分析
4.1 GhUPL7基因表达模式分析
4.1.1 GhUPL7基因在陆地棉组织器官中的表达特性分析
4.1.2 GhUPL7启动子转基因棉花植株的获得
4.1.3 GhUPL7启动子在棉花中的表达模式分析
4.1.4 小结
4.2 下调GhUPL7转基因棉花株系的筛选及产量性状分析
4.2.1 反义抑制GhUPL7转基因植株筛选
4.2.2 反义抑制GhUPL7转基因植株产量性状分析
4.2.3 反义抑制GhUPL7转基因植株对棉花纤维的影响
4.2.4 GhUPL7 RNAi干扰转基因棉花植株的获得与筛选
4.2.5 小结
4.3 异源表达GhUPL7对拟南芥生长发育的影响
4.3.1 异源表达GhUPL7转基因拟南芥植株的获得
4.3.2 异源表达GhUPL7基因导致拟南芥抽薹提前和第一轮莲座叶侧枝分枝数量增多
4.3.3 异源表达GhUPL7促进拟南芥植株的胚轴伸长
4.3.4 异源表达GhUPL7对拟南芥光形态建成的影响
4.3.5 异源表达GhUPL7对拟南芥中光形态建成关键基因表达水平的影响
4.3.6 调控UPL7基因表达对拟南芥中花青素含量的影响
4.3.7 异源表达GhUPL7拟南芥T-DNA 插入位点的侧翼序列扩增与分析
4.3.8 小结
4.4 GhUPL7转基因植株中AILP1蛋白水平的检测
4.4.1 AILP1蛋白抗体活性检测
4.4.2 反义抑制GhUPL7转基因棉花中AILP1蛋白水平的检测
4.4.3 异源表达GhUPL7转基因拟南芥以及upl7突变体植株中AILP1同源蛋白水平的检测
4.4.4 小结
4.5 GhUPL7基因和AILP1基因在拟南芥中表型存在一致性
第5章 讨论
5.1 泛素连接酶GhUPL7基因参与植物光形态建成
5.2反义抑制GhUPL7转基因棉花纤维与野生型相比无变化
5.3 GhUPL7蛋白参与泛素蛋白降解途径
第6章 结论
6.1 主要结论
6.2 主要创新点
参考文献
附录
附录1 主要缩写词
附录2 主要引物序列
附录3 硕士期间参与课题及发表论文
致谢
