家蝇蛆粉对ApoE-/-小鼠抗动脉粥样硬化作用及其机制的探讨

摘要

动脉粥样硬化(atherosderosis，AS)指动脉及其分支的脉管壁内膜及内膜下的脂质沉着，同时伴有中层平滑肌细胞移行至内膜下增殖，使内膜增厚，形成黄色或灰黄色状如粥样物质的斑块。动脉粥样硬化可导致心脑血管疾病，严重危害人类的健康。我国动脉粥样硬化及其引发的心脑血管疾病发病率逐年上升，且发病呈“年轻化”的趋势。动脉粥样硬化已为医学界所重视，但是其治疗的药物疗效有限且需要长期使用。
　　 目前，临床上广泛使用的抗动脉粥样硬化药物如辛伐他汀、普罗布考等均存在不容忽视的毒副作用，其长期疗效在临床上也备受质疑。因此，寻找天然、无毒、有效的抗动脉粥样硬化药物是临床药学的研究热点之一。
　　 家蝇蛆（Housefly maggot, HM）含有多种活性肽，已被证实有降低胆固醇，提高机体免疫能力，降血压等作用。从上个世纪80年代至今，家蝇抗菌肽、甲壳素等生物活性物质的研究一直是生命科学研究领域的热点之一。我们的前期结果显示，家蝇蛆粉能够有效降低高脂血症SD大鼠的血脂水平，并对SD大鼠动脉粥样硬化也有一定的预防作用。为进一步探讨家蝇蛆粉的抗动脉粥样硬化作用，本实验以国际公认的动脉粥样硬化模型——ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠为研究对象，从降血脂、抗氧化等方面来探讨家蝇蛆粉的抗动脉粥样硬化机制。
　　 研究方法：
　　 1、ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠分组和用药处理：繁殖鉴定ApoE-/-小鼠，随机分组，分为模型对照组、家蝇蛆粉处理（8g/kg/day）组、辛伐他汀处理（50mg/kg/day）组；ApoE-/-小鼠具有C57BL/6J小鼠遗传背景，故设一组C57BL/6J小鼠以做正常空白对照。为探讨家蝇蛆粉的抗氧化机制，以临床常用抗氧化类治疗动脉粥样硬化药物普罗布考（30mg/kg/day）设一处理组以做阳性参照。各组小鼠予灌胃用药处理，模型对照组和空白对照组则予灌胃生理盐水处理。
　　 2、家蝇蛆粉对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的预防及治疗效果探讨：每组小鼠用药处理8周后，以辛伐他汀处理组做阳性参照，分别检测其主动脉和腹主动脉油红O 染色斑块百分比，心脏三尖瓣部位病理切片油红-O 染色斑块面积，主动脉横切面病理切片Elastin Van Gieson （EVG）染色观察弹性纤维增生情况等，并对数据进行统计分析。
　　 3、家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的降血脂机制探讨：每14天检测各组ApoE-/-小鼠的胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平，以辛伐他汀处理组做阳性参照，观察家蝇蛆粉的降血脂效果。同时测定小鼠胆汁流量和胆汁酸含量，检测HMG-CoA 还原酶活性，以探讨家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的降血脂机制。
　　 4、家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的抗氧化机制探讨：每14天检测各组ApoE-/-小鼠的高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）水平，以普罗布考处理组做阳性参照，观察家蝇蛆粉的抗氧化效果。同时于用药8周后检测小鼠血丙二醛（malonyldialdehyde，MDA）和氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）水平，并检测各组小鼠心脏三尖瓣粥样斑块中巨噬细胞特异表达蛋白MAC-3，了解巨噬细胞分布情况，以探讨家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的抗氧化机制及其与巨噬细胞迁移的相关性。
　　 实验结果：
　　 1.家蝇蛆粉对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的预防及治疗效果探讨：预防试验中，模型对照组和家蝇蛆粉预防组间的主动脉和腹主动脉部位动脉粥样硬化斑块面积百分比平均值存在非常显著差异（21.34％，13.58％，P<0.01），两组间的心脏三尖瓣部位动脉粥样硬化斑块面积平均值同样存在非常显著差异（216272.27±28649μm2，131998.17±24165μm2，P<0.01）。而在治疗试验中，模型对照组和家蝇蛆粉治疗组间的主动脉和腹主动脉部位动脉粥样硬化斑块面积百分比平均值也存在非常显著差异（22.53％，15.91％，P<0.01），两组间的心脏三尖瓣部位动脉粥样硬化斑块面积平均值同样存在显著差异（283423.83±34649 μm2，236272.2347±36749μm2，P<0.05）。另外，对ApoE-/-小鼠主动脉横切面组织病理切片进行Elastin Van Gieson （EVG）弹性纤维特异染色结果显示，预防和治疗实验均同时使ApoE-/-小鼠主动脉弹性纤维增生情况缓解明显。
　　 2.家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的降血脂机制探讨：家蝇蛆粉处理组的TC水平远低于模型对照组，存在非常显著差异（P<0.01），接近于辛伐他汀处理组；家蝇蛆粉处理组的TG水平相对于模型对照组也有降低，存在显著差异（P<0.05）。家蝇蛆粉处理组的胆汁流量增加且优于辛伐他汀处理组，并具有显著差异（86.15±16.11μl/h，121.02±15.76μl/h，P<0.05），总胆汁酸（TBA）排泄量增加并具有显著差异（3.34±0.68μmol/h，4.79±1.39μmol/h，P<0.05），HMG-CoA 还原酶的活性降低并具有显著差异（P<0.05）。
　　 3.家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化的抗氧化机制探讨：与模型对照组对比，家蝇蛆粉处理组HDL水平逐步提高，并在14周左右维持在较高的一个水平，存在非常显著差异（P<0.01）；家蝇蛆粉处理组的LDL水平在用药后得到有效控制，维持在一个较低的水平。家蝇蛆粉处理组的肝脏匀浆MDA和Ox-LDL水平与模型对照组相比存在非常显著差异(P<0.01；P<0.005)，其中Ox-LDL的下降幅度甚至高于普罗布考组。免疫组化结果显示家蝇蛆粉处理组粥样斑块中巨噬细胞数量明显减少。
　　 结论：
　　 1.家蝇蛆粉对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化有一定的缓解作用。其主要表现为家蝇蛆粉分别减少了ApoE-/-小鼠主动脉和腹主动脉部位以及心脏三尖瓣部位动脉粥样硬化斑块的面积；同时，使ApoE-/-小鼠主动脉弹性纤维增生的情况得到明显缓解。
　　 2.家蝇蛆粉的抗动脉粥样硬化作用涉及血脂的下降，其机制和胆汁流量增加、总胆汁酸（TBA）合成促进、机体胆固醇排出加速及胆固醇合成系统限速酶（HMC-CoA）
　　 的抑制相关。
　　 3.家蝇蛆粉的抗动脉粥样硬化作用涉及抗氧化效应，其机制和HDL水平升高以保护LDL不被氧化为Ox-LDL，降低机体的氧化压力以减少Ox-LDL 生成，巨噬细胞向血管壁迁移受抑制以减缓泡沫化脂质斑块形成等相关。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 前 言

第二章 家蝇蛆粉预防动脉粥样硬化的作用研究

第三章 家蝇蛆粉治疗动脉粥样硬化的作用研究

第四章 家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化作用的降血脂机制探讨

第五章 家蝇蛆粉抗动脉粥样硬化作用的抗氧化机制探讨

参考文献

全文总结

附录

致 谢