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【6h】

人睾丸精原细胞分离和培养的初步研究

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前 言

第一部分饲养层的制备

材料与方法

结 果

讨论

第二部分人睾丸精原细胞的分离和纯化

材料与方法

结 果

讨论

第三部分人精原细胞的体外培养

材料与方法

结 果

讨论

全文结论

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参考文献

文献综述 精原干细胞研究进展

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摘要

针对目前睾丸SSC细胞的研究现状,该课题通过应用正常人胎儿睾丸组织分离纯化获得较高纯度的人SSC,然后选择不同的培养基和培养条件进行培养,从而寻求人SSC体外长期培养的优化培养体系,并为进一步行人SSC移植和功能鉴定奠定基础.该研究分三步进行:1. 进行饲养层制备:制备不同的饲养层包括小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层、小鼠胚胎成纤维细胞无限系(STO)饲养层以备用于精原细胞的培养;2.人睾丸SSC的分离和纯化:采用联合二步酶法消化、Percoll密度梯度离心、差异粘附等分离和纯化步骤获得成活率良好,含量较高的人睾丸精原细胞;3.培养条件的优化及精原细胞的长期培养观察:选择不同的培养介质DMEM、DMEM/F12、无血清培养基等在不同的共培养体系中进行细胞培养和观察,并选择可使人SSC在体外稳定存活的培养体系进行了长期培养观察.

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