人乳腺癌细胞BRCA1对hTERT基因表达的调控研究

摘要

乳腺癌(breastcancer)是妇女最常见的恶性肿瘤之一。近20年来其发病率呈明显上升趋势，严重危害妇女的身心健康。既往研究表明端粒酶激活与乳腺癌的早期生成密切相关。作为人端粒酶最核心成分人端粒酶催化亚单位hTERT(humantelomerasereversetranscriptase)是调节端粒酶活性的限速步骤，因此研究hTERT转录调控有助于揭示乳腺癌部分发生机制。乳腺癌易感基因BRCA1是近来发现的肿瘤抑制基因。大量研究证明，BRCA1基因结构、功能异常不仅与遗传性乳腺癌的发生密切相关，与部分散发性乳腺癌的发生关系也很密切。近来有许多学者在研究肿瘤细胞hTERT上游E-box位点突变时推测BRCA1与hTERT转录调控相关。但在乳腺癌中BRCA1基因是否参与hTERT转录调控及其相关机制目前仍不明确。 本研究分析人乳腺癌和癌旁组织中hTERTmRNA和BRCA1蛋白表达及二者之间的表达关系，观察外源性BRCA1基因转染MCF-7细胞强制表达后对hTERT蛋白表达的影响，以了解人乳腺癌组织中BRCA1蛋白对hTERTmRNA转录调控及对hTERT蛋白表达的影响，为进一步深入研究BRCA1对hTERT的调控机制奠定基础。 采用RT-PCR和免疫组化分别检测43例乳腺癌患者和40例乳腺癌癌旁组织中的hTERTmRNA和BRCA1蛋白的表达；在体外实验中应用脂质体将BRCA1真核表达质粒转染至乳腺癌MCF-7细胞中强制表达，WesternBlot检测转染细胞中hTERT蛋白表达的变化。噻唑蓝比色试验(MTT)观察BRCA1真核表达质粒转染MCF-7细胞后细胞增殖活性的变化。 结果表明：41例乳腺癌组织中，30例检测出hTERTmRNA阳性，阳性率75.0％；而40例癌旁组织中只有2例检测出hTERTmRNA表达阳性，阳性率5.0％，在乳腺癌和癌旁组织中hTERTmRNA表达具有显著差异(卡方检验p＜0.05)。在41例乳腺癌标本中，检测出BRCA1蛋白阳性15例，阳性率34.8％；而在40例癌旁组织中31例检测出BRCA1蛋白阳性，阳性率77.5％。BRCA1蛋白的表达在两组间也有显著的差异(卡方检验p＜0.05)。并且在乳腺癌组织中hTERTmRNA的高表达和BRCA1蛋白的低表达有着明显的相关性(p＜0.05)。体外实验中，将pcDNA3.1-BRCA1真核表达质粒转染MCF-7乳腺癌细胞株后，WesternBlot结果发现BRCA1蛋白表达明显增加，同-4-时hTERT蛋白表达受到明显抑制。噻唑蓝(MTT)比色法观察转染后的MCF-7乳腺癌细胞株生长活性明显降低，与对照组相比具有显著差异(p＜0.05)。 综合本研究的结果，我们发现BRCA1蛋白在乳腺癌组织中的弱表达与乳腺癌组织中端粒酶hTERT高转录活性密切相关，BRCA1基因在人乳腺癌MCF-7细胞中的强制高表达，可以抑制hTERT基因的表达，并抑制MCF-7细胞的增殖能力。BRCA1对hTERT转录活性抑制能力的减弱可能参与乳腺癌生成，在乳腺癌发生发展机制中具有重要的作用。

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参考文献

文献综述一BRCA1在乳腺癌中的研究进展

文献综述二端粒酶hTERT相关转录因子研究进展

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