胎盘生长因子在胎儿生长受限中作用的研究

摘要

目的：胎儿生长受限是围产期的重要并发症之一，不仅影响胎儿的发育，远期也影响儿童期及青春期的体能与智能发育，且FGR的患儿在成人后发生心血管系统、神经系统及内分泌等方面疾病的机会大于正常者。FGR的病因国内外已有较多的研究，但目前病因仍不明确。国内外多项研究表明，胎儿生长受限时，胎盘绒毛发育及绒毛血管扩张不良，同时蜕膜组织中螺旋动脉扩张不良，这导致子宫胎盘血流灌注不良，最终造成胎儿宫内慢性缺氧，影响胎儿生长发育。近年来的研究发现胎盘的生长和发育与多种生长因子有关。胎盘生长因子(PLGF)是一种属于血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)家族成员的生长因子，主要在胎盘局部表达，对胎盘滋养细胞和内皮细胞的生长和功能起着重要的调节作用。在胎盘形成过程中，PLGF能够对滋养细胞、血管内皮细胞的生长、增殖、分化等功能进行调节，适量PLGF有利于胎儿胎盘血管网络的形成，保证了胎儿生长发育的需要。本研究通过对胎儿生长受限时胎盘生长因子在胎盘及胎盘床蜕膜组织中的表达，探索胎盘生长因子在胎儿生长受限发病中的作用。 方法：本研究分临床研究和动物实验两部分。在临床研究中，收集了50例孕妇剖宫产分娩前母血和分娩后脐血、胎盘组织及蜕膜组织，其中正常妊娠(正常组)20例，胎儿生长受限组(FGR组)15例，妊娠期高血压疾病(hypertensiondisordercomplicatingpregnancy)(HDCP组)15例，通过酶联免疫吸附法测定母血及脐血中PLGF的水平，对各组胎盘及蜕膜组织进行HE染色进行普通病理分析；采用免疫组织化学法及分子原位杂交对各组胎盘及蜕膜组织中PLGF及PLGFmRNA的表达水平及表达部位进行研究；采用半定量RT-PCR对组织中的PLGFmRNA表达水平进行半定量分析。动物实验中，通过暂时阻断卵巢动脉成功构建FGR动物模型后，将健康成年雌性SD大鼠分为三组，分别为假手术组(ratnormalcontrol，RNC)、同体对照组(rathomogeneitycontrast，RHC)、异体对照组(ratvariantcontrast，RVC)，每组各10只，成功交配后标准状态下饲养，每周测量体重。于妊娠第15天，实施手术，于妊娠第21天全部孕鼠施行剖宫产终止妊娠。对比各组中新生鼠仔体重、胎盘重量及鼠仔脑、心、肝、肺、肾的重量。同时于手术时取胎盘组织，分别行免疫组化、原位杂交及半定量RT-PCR进行组织中PLGF及PLGFmRNA表达的分析。 结果：在临床研究中，母体外周血及脐血ELISA测定结果显示，正常妊娠组高于FGR组及HDCP组(P＜0.01)。各组胎盘HE染色结果显示，正常组足月胎盘组织中，绒毛发育良好，绒毛干血管扩张明显，间质细胞少，可见较多的合体细胞结节及合体细胞桥。胎盘床蜕膜组织中可见一些滋养细胞及结构清晰的螺旋小动脉。FGR组及HDCP组胎盘绒毛发育欠佳，绒毛血管扩张不良，间质细胞增生，滋养细胞层的合体细胞结节及合体细胞桥较少。蜕膜组织中滋养细胞及螺旋小动脉少见，扩张不良。免疫组化及原位杂交结果显示，PLGF及PLGFmRNA主要在合体滋养细胞表达，绒毛间质及内皮细胞中也有散在的表达，蜕膜细胞及少量滋养细胞中可见散在表达。FGR组与HDCP组胎盘绒毛和蜕膜PLGF及PLGFmRNA表达部位与正常妊娠组无差异，但表达的细胞少，且呈弱阳性表达。HDCP组及FGR组胎盘及蜕膜组织中PLGFmRNA表达量明显低于正常组(P＜0.05=，但两组间差异不显著(P＞0.05)。 动物实验中，各组孕鼠于妊娠各周体重增长相差不显著(P＞0.05)。各组间死胎率相差不显著(P＞0.05)。假手术组(RNC)及同体对照组对照侧(normalsideofRHCgroup，RHn)鼠仔体重、胎盘重量及新生胎仔脑、心、肺、肝、肾重量明显高于异体对照组(RVC)及同体对照组实验侧(FGRsideofRHCgroup，RHf)，相差均显著(P＜0.01)。而RNC与RHn间、RVC与RHf间无明显差异(P＞0.05)。胎盘组织病理结果显示，RNC与RHn胎盘蜕膜带较薄，主要由纤维性成分组成。基带为数层滋养叶巨细胞及少量糖原细胞组成的网络样结构，母血即从中通过进入迷路带。RVC与RHf胎盘蜕膜带肿胀增厚，炎性细胞浸润；基带滋养叶巨细胞增生，基带增厚；迷路带滋养叶细胞增生肥大，部分水肿，血间膜增厚，部分区域肿胀、变性、坏死，结构不清。免疫组化、原位杂交及半定量RT-PCR结果显示RNC与RHn胎盘PLGF及PLGFmRNA表达均明显多于RVC与RHf(P＜0.05)，而RNC与RHn间、RVC与RHf间无明显差异(P＞0.05)。 结论：1.正常妊娠时，胎盘绒毛合体滋养细胞合成并分泌PLGF，在绒毛间质细胞、内皮细胞及蜕膜细胞中也有少量PLGF表达。本研究发现FGR时，胎盘及蜕膜组织中PLGF的表达量明显减少，且这种降调节发生在基因转录水平，国内外相关报道较少。2.FGR时可导致死产、新生儿窒息等围产儿并发症或留下中枢神经系统后遗症，本研究发现FGR时孕晚期母体外周血及脐血中PLGF水平均明显低于正常妊娠，这使得通过母血PLGF水平来间接评估胎盘功能状态或胎儿宫内状况成为可能，可以通过监测孕妇血清PLGF的水平来指导产科医生处理有关FGR等病理妊娠的临床问题。3.根据大鼠子宫动脉是卵巢动脉的一个分支的解剖特点，本研究通过阻断卵巢动脉从而阻断子宫动脉血流，成功建立缺血缺氧性FGR孕鼠模型。该模型可显著抑制胎儿的发育，胎儿体重、胎盘重量及胎儿各重要脏器的重量均明显低于正常妊娠。该模型重复性好，操作简便，并可成功设立同体对照，不仅克服了阻断腹主动脉构建FGR模型不能设立自身对照的缺陷，也解决了阻断子宫动脉构建FGR模型技术要求高、不易推广的问题，更具科学性和实用性，为进行FGR相关的产科理论研究提供了一个有利的技术平台。4.本研究通过FGR动物模型造成子宫胎盘缺血缺氧的环境，导致胎盘PLGF合成及分泌减少，与离体实验中缺氧可下调PLGF表达的研究结果一致，表明缺氧所致的胎盘PLGF表达下降可能是FGR发病机制中的一个重要环节，其导致滋养细胞和内皮细胞增殖能力下降，新生血管形成减少，可造成胎盘绒毛及其血管网络发育不良，胎盘血供减少，导致胎儿发育受限，可以通过调节PLGF对胎盘滋养细胞及血管的作用，改善胎盘血流灌注，最终改善胎儿宫内状况。

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英文缩写一览表

前言

第一部分临床研究部分

材料与方法

结果

讨论

第二部分动物实验部分

材料与方法

结果

讨论

全文结论

参考文献

致谢

照片1

照片2

照片3

照片4

文献综述一胎儿生长受限病因的研究进展

文献综述二胎盘生长因子的生物学功能及其与妊娠的关系

攻读硕士学位期间发表的论文