INK4a/ARF基因共表达状态与肺癌患者预后的关系及阴性表达发生机制研究

摘要

目的 在前期研究的基础上，对p14ARF和p16INK4a蛋白共表达阴性和共表达阳性的非小细胞肺癌(NSCLC)患者的生存期及其它临床指标进行分析，以探讨p14ARF和p16INK4a蛋白共表达状态与NSCLC患者预后的关系。并对这两组患者癌组织ARF、INK4a基因启动子区进行甲基化检测，以深入探讨ARF、INK4a启动子甲基化与其蛋白表达之间关系。 方法选择p14ARF和p16INK4a蛋白共表达阴性的NSCLC患者35例，共表达阳性的NSCLC患者20例，分别称为(p14+p16)-组和(p14+p16)+组。应用SPSS11.5软件，采用χ2检验对两组患者的临床特征进行比较；Kaplan-Meier法计算生存率，并绘制生存曲线；Log-rank检验两组生存率的差异性；Cox模型做多因素分析；采用甲基化特异性PCR(MSP)方法对两组患者癌组织INK4a和ARF基因启动子的甲基化状态进行检测。甲基化的发生与临床特征的比较以及(p14+p16)-组和(p14+p16)+组间的甲基化比较采用χ2检验，ARF与INK4a甲基化之间的相关分析采用Spearman相关分析。所有数据统计结果若p＜0.05，则认为有显著的统计学差异。 结果1.(p14+p16)-组患者的中位生存期为21月，1年、2年、3年生存率分别为72.24％、42.37％、22.60％，总生存率为38.46％；(p14+p16)+组患者的中位生存期为42月，1年、2年、3年生存率分别为88.89％、75.21％、65.81％，总生存率为61.11％。经Log-rank检验，两组患者的生存率有显著的差异(p＜0.05)。Cox比例风险模型分析显示，p14ARF和p16INK4a蛋白共表达阴性是显著的不良预后因素。 2.(p14+p16)-组，18例发生INK4a基因启动子甲基化，占51.4％(18/35)；(p14+p16)+组，2例发生INK4a基因启动子甲基化，占10％(2/20)。INK4a基因启动子异常甲基化在共表达阴性组和阳性组的差异有显著意义(p=0.002)。 3.(p14+p16)-组，8例发生ARF基因启动子甲基化，占22.8％(8/35)；(p14+p16)+组，2例发生ARF基因启动子甲基化，占10％(2/20)。两组比较，差异无显著意义(p=0.409)。 4.(p14+p16)-组35例NSCLC患者中，ARF、INK4a基因启动子共甲基化5例，占14.2％(5/35)；ARF基因甲基化而INK4a基因未甲基化3例，占8.5％(3/35)；INK4a基因甲基化而ARF基因未甲基化13例，占37.1％(13/35)；ARF、INK4a基因均未甲基化14例，占40.0％(14/35)。ARF基因甲基化的发生有伴随INK4a基因甲基化发生的趋势。但相关分析统计显示，ARF、INK4a基因异常甲基化相互之间无显著相关性(p=0.482)。 结论1.(p14+p16)+组NSCLC患者的1年、2年、3年生存率及总生存率均显著高于(p14+p16)-组，表明INK4a/ARF基因共表达状态与NSCLC患者预后密切相关，共表达阴性患者预后差。 2.NSCLC患者INK4a基因启动子甲基化在(p14+p16)-组的发生率显著高于(p14+p16)+组，表明INK4a基因启动子甲基化是导致p14ARF、p16INK4a蛋白共表达阴性的重要机制。 3.NSCLC患者ARF基因启动子发生甲基化的同时，有伴随INK4a基因甲基化发生的趋势，但此情况并不常见，表明INK4a和ARF基因启动子甲基化可能是相对独立的事件。

目录

第三军医大学研究生学位论文独创性声明和版权使用授权书

英文缩略语表

前 言

第一部分INK4a/ARF基因共表达状态与肺癌患者预后的关系

材料与方法

结 果

讨 论

第二部分非小细胞肺癌INK4a/ARF基因CpG岛异常甲基化研究

材料与方法

结 果

一、MSP的特异性

二、NSCLC患者癌组织中INK4a基因甲基化分析

三、NSCLC患者癌组织中ARF基因甲基化分析

四、NSCLC患者癌组织中INK4a、ARF基因甲基化相关分析

讨 论

结 论

致 谢

参考文献

文献综述一肺癌相关抑癌基因甲基化研究进展

文献综述二DNA甲基化在肿瘤诊断及治疗中的应用研究进展

研究生期间发表文章