准分子激光角膜屈光术后皮质类固醇性高眼压发病机制的初步研究

摘要

目的： 通过回顾性分析准本院准分子激光角膜屈光术(laserkeratorefractivlesurgery，LKRS)后皮质类固醇性高眼压(glucocorticoid-inducedocularhypertension，GIOH)的发病率及临床相关因素，检测GIOH患者泪液总蛋白和各蛋白成分的变化，并分析其糖皮质激素受体(Glucocorticoidreceptor,GR)基因多态性的变化，探讨GIOH的发病机制。 方法：实验分以下三部分 第一部分：LKRS后GIOH临床相关因素分析 回顾性分析LKRS后2060例患者，计算GIOH的发病率；对其中88例GIOH患者及随机选择的125例正常眼压者，采用Logistic回归分析GIOH与年龄、性别、眼别、最大径线屈光度、最大径线曲率、切削深度、眼底杯/盘比(C/D)值及术前眼压的相关性。 第二部分：LKRS后GIOH泪液蛋白变化 研究对象：LKRs术前组、术后1周地塞米松(dexamethasone，DEX)组、、术后1周氟米龙(fluorometholone，FML)组、术后1月组、术后3月组各10例，术后高眼压组23例。 方法： 1.毛细管法取基础泪液5ul，-20℃保存备用； 2.BCA法测泪液总蛋白浓度； 3.泪液SDS-PAGE，Bio-Rad图像分析系统分析泪液中各种蛋白的变化。 第三部分：GR基因多态性分析 研究对象：重庆地区健康人266名，准分子激光角膜屈光术后GIOH患者39人，正常眼压者37人，POAG患者11人。 方法： 1.所有受试者均取外周静脉血1ml，提取全血DNA； 2.对重庆地区健康人进行GR基因分型，并计算各位点SNP发生频率。基因分型方法：根据GR基因ER22/23EK、N363S和BclⅠSNP位点设计PCR引物，PCR扩增后，选择合适的限制性内切酶进行酶切及电泳鉴定； 3.哈迪-温伯格(Hardy-Weinberg，H-W)平衡分析； 4.根据健康人GR基因分型的结果，对LKRS后GIOH患者、正常眼压者及POAG患者进行GR基因BclⅠ位点、N363S位点SNP分型 5.分别对各组进行哈迪-温伯格(Hardy-Weinberg，H-W)平衡分析 6.计算各组SNP发生频率，并分析SNP与GIOH和POAG的关系，比较组间差异。 结果： 1.LKRS后GIOH发病率为3.5％；GIOH的发生与患者眼底C/D值明显相关； 2.泪液总蛋白：LKRS后1周DEX组明显高于其它各组；LKRS后高眼压组各时间点的变化趋势同正常眼压组； 3.LKRS后GIOH患者泪液溶菌酶及乳铁蛋白浓度增加； 4.重庆地区健康人中未发现GR基因编码区ER22/23EK、N363S多态性，而发现有内含子BclⅠ位点多态性存在，G等位基因发生频率为23.5％；H-W平衡分析发现所选人群符合H-W平衡。 5.LKRS后正常眼压和高眼压患者GR基因BclⅠ位点SNP发生频率分别为21.62％、18.29％，两者间无显著差异； 6.POAG患者GR基因N363S和BclⅠ位点SNP发生频率分别为0、33.3％，与其他各组间无显著差异。 结论： LKRS后GIOH的发病率为3.5％，GIOH的发生与患者视乳头杯/盘比值明显相关；LKRS后早期泪液总蛋白浓度增加，GC由DEX改为FML后泪液总蛋白浓度降低，推测与DEX的强效抗炎、抗免疫和对间叶组织的作用有关；观察到LKRS后GIOH患者泪液溶菌酶及乳铁蛋白浓度增加的现象，其机制有待进一步研究。重庆地区人群中GR基因无ER22/23EK及N363S多态性存在，与白种人不同，而与日本人相似；存在BclⅠ位点SNP，但发生频率为23.5％，较白种人低。LKRS后GIOH患者与正常眼压患者、健康人群、POAG患者在GR基因N363S位点和BclⅠ位点SNP发生频率上无显著差异；虽然GR基因N363S和BclⅠ位点多态性与GC敏感性增强有关，但与GIOH、POAG的发生之间没有统计学关联，推测GR基因内或GR基因外可能存在其它与GIOH、POAG发生有关的多态性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写注释

声明

前 言

第一部分 准分子激光角膜屈光术后皮质类固醇性高眼压临床相关因素分析

资料与方法

结 果

讨 论

参考文献

第二部分 准分子激光角膜屈光术后皮质类固醇性高眼压泪液蛋白变化

资料与方法

结 果

讨 论

参考文献

第三部分 糖皮质激素受体基因多态性分析

实验一 重庆地区健康人群GR基因ER22/23EK、N363S及Bcl Ⅰ位点多态性分型

材料与方法

结 果

实验二 准分子激光角膜屈光术后高眼压、正常眼压和原发性开角型青光眼GR基因Bcl Ⅰ、N363S位点SNP

对象与方法

结 果

讨 论

全文结论

参考文献

致 谢

文献综述一 皮质类固醇性青光眼研究进展

文献综述二 糖皮质激素受体基因多态性与糖皮质激素敏感性关系研究进展

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