HPV16/18 E7对宫颈癌细胞中HDAC1表达的影响

摘要

研究目的:宫颈癌是女性多发的恶性肿瘤,而人类乳头瘤病毒(HPV)感染是早已被临床和流行病学研究证实的宫颈癌发生发展的主要因素。其中HPV16、18是临床检出率相对较高的两种HPV高危亚型。HPV病毒编码的E7是重要的原癌蛋白,在肿瘤发生中起着重要作用。表观遗传学改变是另一个与肿瘤发生相关的因素,很多肿瘤中都观察到异常水平的HDAC1的表达。而HPV感染类型不同与HDAC1表达的关系未见报道,因此我们设计了本实验观察不同HPV感染情况的宫颈癌细胞系中HDAC1的表达情况,以及E7对HDAC1表的的影响。另外,E7蛋白分为三个结构域,对HDAC1的表达改变有重要作用的分区尚不明确,因此我们构建了分别缺失各一个结构域的突变体,以期在后续实验中检测其功能改变。
　　 方法及结果:
　　 1.HDAC1在人宫颈癌细胞系C-33A中表达高于CaSki和HeLa
　　 用RT-PCR和Western Blot的方法检测人宫颈癌细胞系C-33A、CaSki和HeLa中HDAC1的转录水平和蛋白水平差异。结果显示,HDAC1在C-33A(无HPV感染)中表达最高,CaSki(HPV16感染)中次之,HeLa(HPV18感染)中最低。
　　 2.转染HPV16E7,HPV18E7后C-33A细胞系中HDAC1表达降低
　　 向无HPV感染的C-33A细胞转染pEGFP-HPV18E7和pEGFP-N1空载体,通过RT-PCR和Western Blot观察转染后两组HDAC1表达量差异。结果显示,转染pEGFP-HPV18E7组的C-33A细胞中的HDAC1的表达明显低于转染pEGFP-N1组。
　　 3.RNAi策略沉默CaSki细胞HPV16E7导致HDAC1表达上调
　　 向HPV16感染的CaSki细胞转染siRNA沉默HPV16E7,对照组转染无关序列,通过RT-PCR观察转染后HDAC1表达改变。结果显示,转染siRNA组的HDAC1的表达明显高于转染无关序列组。
　　 4.构建HPV16E7不同结构域缺失表达载体
　　 用已克隆到pEGFP-N1载体上测序正确的HPV16E7的cDNA为模板,经常规PCR或一步反向PCR致突变策略扩增得到不同HPV16E7结构域缺失的表达载体:pEGFP-HPV16E7/CR1&2、pEGFP-HPV16E7/CR1&3和pEGFP-HPV16E7/CR2&3。
　　 结论:
　　 1.HDAC1在不同HPV感染的宫颈癌细胞系中表达有差异,在C-33A(无HPV感染)细胞中表达最高,在CaSki(HPV16感染)细胞中表达次之,在HeLa(HPV18感染)细胞中表达最低。
　　 2.HPV病毒E7原癌蛋白可以下调宫颈癌细胞系中HDAC1表达。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略词表

前言

实验一 HDAC1在人宫颈癌细胞C-33A中的表达高于CaSki和HeLa细胞

材料

方法

结果

实验二 转染HPV16/18 E7后C-33A细胞中HDAC1表达降低

材料

方法

结果

实验三 RNAi策略干扰CaSki细胞HPV16E7导致HDAC1表达上调

材料

方法

结果

实验四 HPV16E7不同结构域缺失突变体的构建

材料

方法

结果

讨论

小结

结论

致谢

参考文献

文献综述 人类乳头瘤病毒的研究进展

硕士研究生期间发表论文