口服调节性T细胞源性exosomes对大鼠移植肾存活的影响

摘要

背景和目的:
　　肾移植术后的慢性排斥反应是导致移植肾失功的主要原因,探索减轻慢性排斥反应,建立免疫耐受状态的有效途径,确保移植肾长期存活是器官移植领域的重要课题之一[1]。CD4+CD25+Treg是一群具有重要免疫调节功能的细胞,在进行器官移植手术之后,它可以调节机体内的免疫应答向免疫耐受状态发展,并促使机体维持免疫耐受状态[2]。外泌体(exosomes)是体内多种活细胞以胞吐的方式分泌到细胞外的囊性小泡,直径40~100nm[3],携带多种母体细胞的蛋白,RNA等物质,且不同细胞来源的exosomes具有不同的功能[4],例如:肿瘤细胞来源的exosomes能异常地高表达 Fas配体(FasL),成功诱导活化的细胞死亡。我们前期的研究显示,通过静脉回输的方式,CD4+CD25+Treg细胞分泌的exosomes可发挥免疫调节作用[5],诱导机体产生免疫耐受状态,但其作用机制尚不明确,是否能通过直接口服Treg源性exosomes途径诱导耐受,相关文献也鲜有报道,因此,我们设计了相关实验,研究口服CD4+CD25+Treg源性exosomes是否会产生口服耐受,进而影响大鼠移植肾存活情况。
　　方法:
　　肾移植术前5天开始,给实验组受体大鼠用Treg细胞源性exosomes悬液灌胃(浓度为1.15g/ml,0.5ml/d),给对照组受体大鼠以同样方式灌饲PBS溶液。观测记录两组大鼠术后的存活时间,活动状态,精神饮食情况等。分别在术后第3、7、10、13天,通过颈静脉穿刺抽血,检测受体血肌酐(Scr)和尿素氮(UN)含量。移植术后第10天,取大鼠移植肾做病理切片并观察。
　　结果:
　　实验组受体大鼠存活的时间相对于对照组受体大鼠明显延长(P<0.05)。术后,实验组受体大鼠Scr和UN水平保持相对稳定,而对照组受体大鼠Scr和UN在术后第10天、13天相对于实验组明显升高(P<0.05)。病理结果显示,实验组大鼠移植肾病理损伤与对照组相比明显较轻。
　　结论:
　　通过给受体大鼠灌饲Treg细胞所分泌的exosomes,明显延长了移植肾的存活时间,且功能得到了明显改善。

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第一章 前 言

第二章 Treg细胞的分离培养

2.1 实验动物与主要试剂

2.2 Treg细胞的分离与培养

2.3 结 果

2.4 讨 论

第三章 Treg细胞源性exosomes悬液制备及鉴定

3.1 主要试剂和仪器

3.2 Exosomes悬液制备

3.3 Exosomes的鉴定

3.4 结 果

3.5 讨 论

第四章 大鼠肾移植模型的建立及移植肾存活情况监测

4.1 实验动物与材料

4.2 实验方法

4.3 结 果

4.4 讨 论

参考文献

文献综述

参考文献

攻读硕士期间发表的论文

致谢