PDTC增强脑胶质瘤U251细胞系对TMZ敏感性的研究

摘要

R739.91:R730.53
　　号错
　　脑胶质瘤是人类最常见的颅内原发性肿瘤，也是中枢神经系统恶性肿瘤患者最重要的死亡原因。尽管临床上积极采用包括手术切除、放射和化疗等的综合治疗方案，恶性胶质瘤患者的总生存率仍然很低。替莫唑胺(temozolomide，TMZ)是一种新型烷化剂，它对治疗脑胶质瘤有确切的临床疗效。采用“手术+放疗同步TMZ化疗+辅助TMZ化疗”的综合治疗策略，对患者的无进展生存期(PFS)和五年生存率有显著的改善，但对总生存率无明显提高。然而，很多因素影响了TMZ的临床疗效，其中脑胶质瘤耐药现象的产生是主要原因之一。包括O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（O-6-methylguanine DNA-methyltransferase，MGMT）的内源性和诱导性高表达等原因促进了脑胶质瘤对TMZ治疗的抵抗。MGMT能专门去除TMZ添加的鸟嘌呤残基O6位置的甲基，从而逆转TMZ的细胞毒性效果。因此TMZ化疗效果可能通过抑制MGMT的活性得到明显的改善。NF-κB通路的异常激活促进了多种实体瘤（包括胶质母细胞瘤）的发生、进展和放疗或化疗抵抗密切相关。更深入的分子实验发现，MGMT的表达在一定程度上受NF-κB通路的调控，同时NF-κB通路本身，MGMT，以及BCL-XL、Bcl-2、Survivin等NF-κB通路的靶基因，可被放、化疗刺激表达，在细胞存活、抗凋亡和抵抗治疗方面发挥关键作用。本实验以脑胶质瘤U251细胞系为实验对象，利用二硫代氨基甲酸吡咯烷(ammonium pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)，一种NF-κB特异抑制剂，单独或与TMZ一起处理U251细胞系，观察抑制NF-κB的功能对TMZ化疗效果的改变;同时检测TMZ处理条件下，PDTC如何改变MGMT和BCL-XL、Survivin等抗凋亡蛋白的表达水平。
　　目的:观察NF-κB抑制剂PDTC对脑胶质瘤U251细胞生物性状的改变;探究PDTC是否能增强U251细胞对TMZ化疗的敏感性;探讨PDTC改变TMZ效果可能涉及的分子机制。
　　方法:1.根据不同处理将细胞分为对照组(control)、TMZ组、PDTC组和TMZ+PDTC组，后两组又根据PDTC浓度的改变设立不同亚组。
　　2.细胞增殖抑制用MTT实验检测，细胞周期分布和细胞凋亡比例的改变应用流式细胞术检测。
　　3.qRT-PCR和Western blot分别检测基因MGMT、BCL-XL和survivin的mRNA和蛋白表达改变。
　　结果:1.联合使用PDTC时，TMZ对U251细胞的增殖抑制，凋亡诱导和周期阻滞作用显著增强(P＜0.05);
　　2.PDTC处理后MGMT、BCL-XL和survivin的mRNA和蛋白表达水平明显下降。
　　3.TMZ联合PDTC组MGMT和BCL-XL的mRNA和蛋白表达水平显著低于TMZ组(P＜0.05)。
　　结论:1.NF-κB抑制剂PDTC能显著提高U251对TMZ的敏感性.
　　2.PDTC提高TMZ的化疗效果的作用机制很可能与抑制DNA损伤修复基因MGMT和抗凋亡基因BCL-XL的表达相关。

目录

声明

缩略语表

摘要

第一章 前言

第二章 PDTC对胶质瘤U251细胞生物性状的改变

2．1 材料与方法

2．2 实验结果

2．3 讨论

2．4 小结

第三章 PDTC对U251细胞MGMT、BCL-XL和survivin表达的改变

3．1 材料与方法

3．2 实验结果

3．3 讨论

3．4 小结

全文总结

参考文献

文献综述 脑胶质瘤治疗现状及其药物抵抗的产生机制

硕士期间主要发表论文

致谢