盐酸倍他洛尔-蒙脱石脂质体的制备及眼部给药研究

摘要

本课题以青光眼治疗药物盐酸倍他洛尔（BH）为模型药物，结合蒙脱石（Mt）的离子交换性，分别采用酸化法和乙醇注入-硫酸铵梯度法制备载药蒙脱石（Mt-BH）与蒙脱石-盐酸倍他洛尔脂质体（Mt-BH-LP）。并对Mt-BH-LP的制备工艺、体外释放、形态学、粒径及Zeta电位、稳定性、离体角膜透过性、安全性、角膜前滞留时间及降眼压作用进行考察。研究Mt-BH-LP在青光眼临床治疗中的应用前景。
　　对Mt-BH-LP制备工艺进行考察，乙醇注入-硫酸铵梯度法制备的Mt-BH-LP具有高包封率（75.85±2.15％）、高载药量（11.41±0.29%）等特点。体外释放结果显示。BH溶液2.5h内全部释放，而普通脂质体与Mt-BH-LP10h累计释放量分别为69.9%和60.2%，由于Mt的离子交换性，Mt-BH-LP缓释性较好。对Mt-BH-LP开展微观分析，以Zeta电位及激光粒度分析仪测定粒径与Zeta电位，普通脂质体的粒径与Zeta电位分别为166.4±1.89nm和19.33±0.41mV，Mt-BH-LP的粒径与Zeta电位分别为218±22.32nm和17.03±0.25mV。Mt-BH的载入对Mt-BH-LP的粒径和Zeta电位有一定的影响。进一步对Mt-BH-LP稳定性考察结果显示，3周后的Mt-BH-LP包封率和载药量从75.85±2.15%和11.41±0.29%分别下降到58.18±5.1%和8.99±0.72%，包封率和载药量随着贮存时间的增加而下降。维生素E对Mt-BH-LP的抗氧化作用实验显示低浓度的维生素E的加入几乎不产生抗氧化作用，较高浓度的维生素E抗氧化作用良好，但又易产生沉淀。因此，接下来对Mt-BH-LP进行冻干考察。
　　对 Mt-BH-LP冻干工艺考察，结果显示8%的蔗糖作为冻干保护剂对 Mt-BH-LP具有良好的保护作用。冻干后Mt-BH-LP包封率、载药量和粒径分别为70.17±1.13%，10.12±0.68%和247.6±4.22nm。进一步对Mt-BH与Mt-BH-LP形态学进行研究，BH-LP与Mt-BH-LP均呈球形、表面匀润，形态上无明显差异，Mt-BH的载入对Mt-BH-LP的形态无显著影响。而冻干操作对 Mt-BH-LP形态影响较大，表面粗糙。BH-LP、Mt-BH-LP和冻干Mt-BH-LP粒径分别为180nm、220nm和210nm左右，与Zeta电位及激光粒度分析仪测定结果大致相同。
　　对Mt-BH-LP安全性进行评价，鸡胚尿囊膜-台盼蓝染色实验（CAM-TBS）结果显示，NaOH阳性对照组的鸡胚尿囊膜（CAM）出现明显的凝血现象，且台盼蓝吸收量最大（8.81μg），具体刺激性大小为：NaOH>BH溶液>贝特舒>Mt-BH-LP>生理盐水。永生化人角膜上皮细胞毒性实验（MTT）显示，低浓度下Mt-BH-LP和BH有较高的细胞存活率（>60%），而贝特舒细胞存活率一直低于60%，这可能是高粘度和正电荷导致其细胞毒增加，但是在高浓度下贝特舒的细胞毒性要低于BH溶液。综上所述，细胞毒性大小：贝特舒>BH溶液>Mt-BH-LP>空白脂质体。在体兔眼刺激性实验中，各样品Draize得分均小于3，说明Mt-BH-LP对兔眼部无显著刺激性。病理组织学观察显示，Mt-BH-LP长期刺激实验对兔角膜有一定刺激性，所有样品的长期刺激实验对结膜均有不同程度的刺激性，这是由于结膜对外源性物质很敏感的缘故，但是 BH溶液和贝特舒的刺激性要高于 Mt-BH-LP和生理盐水。综合3种刺激性实验结果。Mt-BH-LP的刺激性均小于BH溶液和贝特舒，说明Mt-BH-LP是安全性较高的抗青光眼药物，在临床治疗青光眼中具有潜在的应用价值。
　　BH溶液、贝特舒和Mt-BH-LP6小时累计透过量（Q6h）分别为379.19、54.21和28.89μg，表观渗透参数（Papp）分别为0.975×10-5、0.13×10-5和0.0726×10-5μg. cm.s-1，剂型的改变能有效的减缓药物的释放速度，有利于产生持久的降眼压作用，降低药物毒副作用。Mt-BH-LP Papp最小，是由于药物的释放包括游离、脂质体内部、Mt表面和Mt内部药物的释放，释放途径的增加导致了Mt-BH-LP表观渗透参数降低，说明潜在药物载体Mt-BH的加入增加了脂质体的缓释性。Mt-BH-LP和贝特舒的角膜水化值均在正常范围内，说明Mt-BH-LP对角膜无明显刺激性。而BH溶液的角膜水化值超过了83%，这是由于BH Papp较大的缘故，说明BH溶液对角膜具有一定的刺激性。水化值结果与安全性评价结果具有一致性，Mt-BH-LP刺激性比BH溶液和贝特舒小，安全性更高。
　　在体泪液消除实验中，BH溶液、Mt-BH-LP和贝特舒角膜前滞留时间分别是60，240和300min，三者角膜前滞留能力大小：贝特舒>Mt-BH-LP>BH水溶液，贝特舒由于其粘性较大、滞留能力强，泪液中药物浓度下降较慢。BH溶液、Mt-BH-LP和贝特舒分别在60，120和240min达到最大降眼压作用，BH溶液达到最小眼压值后迅速恢复到正常高眼压值，而Mt-BH-LP和贝特舒恢复缓慢，6h时仍有一定的降眼压作用，降眼压作用大小：贝特舒>Mt-BH-LP>BH溶液，这与角膜前滞留能力结果一致。药物角膜前滞留能力越强，降眼压持续时间越长，可以减少给药次数和毒副作用，增加病人的顺应性。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

前言

1 研究背景

2 蒙脱石在药物载体中的应用

3 脂质体在眼部给药系统中的应用

4 立题依据及研究计划

第一章 Mt-BH-LP的制备与制剂学评价

1 材料

2 方法

3 Mt-BH-LP制剂学评价

4 结果与讨论

5 本章小结

第二章 Mt-BH-LP冻干工艺与TEM观察

1 材料

2. Mt-BH-LP的冻干工艺与TEM观察

3 结果与讨论

4 本章小结

第三章 Mt-BH-LP安全性评价

1 材料

2 Mt-BH-LP安全性评价

3. 结果与讨论

4 本章小结

第四章 Mt-BH-LP初步药动与药效学研究

1材料

2 Mt-BH-LP药动、药效学研究

3 结果与讨论

4. 本章小结

结论与展望

参考文献

攻读学位期间研究成果

致谢