运动干预对大鼠多囊卵巢综合征的影响和作用机制研究

摘要

目的：
　　观察运动干预对大鼠多囊卵巢综合征的影响，研究瘦素(leptin)及其长型受体(OB-Rb)以及细胞因子信号转导抑制物3(SOCS3)在干预前后的变化，揭示运动预防大鼠PCOS的作用机制，为明确PCOS的发病机制、预防和控制PCOS提供科学依据。
　　方法：
　　本实验采取完全随机设计(completely random design)，设置对照组、模型组和干预组进行实验，其中干预组采取运动的干预方式，分为高(2h/d)、中(1h/d)、低(0.5h/d)三个运动强度。放射免疫法测大鼠血清性激素、空腹胰岛素、瘦素水平；HE染色观察卵巢组织学变化；实时荧光定量PCR法检测大鼠卵巢组织中leptin、OB-Rb以及SOCS3 mRNA水平；蛋白免疫印迹法检测卵巢中OB-Rb及SOCS3蛋白水平；免疫组化法检测OB-Rb、SOCS3蛋白在卵巢中的表达部位和强度。
　　结果：
　　大鼠一般情况
　　模型组大鼠PCOS构建成功，表现为肥胖、瘦素抵抗、性激素紊乱、无排卵和卵巢内大量囊状卵泡；空腹胰岛素(FINS)、瘦素(leptin)水平升高。
　　0.5h干预组大鼠体重、血清性激素、瘦素水平均与模型组无统计学差别(P>0.05)；动情周期类似，卵巢内含大量囊状卵泡，罕见正常卵泡和黄体；空腹胰岛素水平小幅下降，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　1h/d的运动干预减轻了大鼠的体重，使之与对照组无统计学差别(P>0.05)，并帮助大鼠恢复排卵功能；卵巢内可见正常卵泡和黄体，伴囊状卵泡；孕酮(P)水平较模型组显著上升但仍低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；卵泡刺激素(FSH)水平显著上升，FINS、leptin水平大幅降低，差异有统计学意义(P<0.05)，均与对照组水平无统计学差别(P>0.05)。
　　除雌二醇(E2)浓度低于对照组水平之外，2h干预组大鼠在体重、动情周期、卵巢形态学方面均有良好表现：2h/d的运动降低了PCOS大鼠睾酮(T)、黄体生成素(LH)、FINS、leptin水平，也提升了P和FSH水平，差异均有统计学意义(P<0.05)。
　　卵巢组织中leptin、OB-Rb以及SOCS3基因的转录水平
　　模型组大鼠卵巢leptin和SOCS3 mRNA高于对照水平，OB-Rb mRNA水平低于对照，差异有统计学意义(P<0.05)。0.5h干预组大鼠卵巢中leptin mRNA没有发生变化，与模型组无统计学差别(P>0.05)，但OB-Rb mRNA升高，SOCS3 mRNA降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。1h干预组大鼠卵巢中leptin mRNA低于0.5h组水平，差异有统计学意义(P<0.05)；OB-Rb mRNA和SOCS3 mRNA均与0.5h组水平无差别(P>0.05)。2h组大鼠卵巢leptin mRNA水平与对照组无统计学差别(P>0.05)；OB-Rb mRNA、SOCS3 mRNA水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。
　　卵巢组织中OB-Rb、SOCS3基因的翻译水平和表达部位
　　OB-Rb在各阶段发育卵泡的颗粒细胞以及卵母细胞中均有表达。随着卵泡的发育，卵泡的颗粒细胞和卵母细胞中OB-Rb表达呈逐渐增强的趋势。模型组和0.5h干预组
　　各发育卵泡颗粒细胞和卵母细胞中 OB-Rb表达量均显著低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。1h和2h的运动干预促进了卵泡和卵母细胞中OB-Rb的表达，显著高于模型组(P<0.05)。三个干预组囊状卵泡颗粒细胞中OB-Rb表达量在组间无统计学差异(P>0.05)，均高于模型组水平(P<0.05)。
　　SOCS3与OB-Rb的表达部位一致。在颗粒细胞中，发育卵泡中SOCS3的表达量与OB-Rb呈现相反趋势；而在卵母细胞中则无明显差别。0.5h和1h干预组各发育卵泡中SOCS3的表达量均低于模型组但高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，而2h干预组出现异常增高，这很可能与2h运动干预显著促进OB-Rb在卵巢中的表达有关。
　　结论：
　　瘦素抵抗是PCOS发病的原因之一；适量的运动通过提高卵巢中OB-Rb的基因表达水平，改善瘦素抵抗，促进卵泡发育，从而达到预防PCOS发病的效果。

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第一章 序言

1.1 多囊卵巢综合征概述

1.2 PCOS的诊断标准

1.3 PCOS研究领域的热点与难点

1.4 本研究的主要目的与内容

第二章 运动干预对大鼠多囊卵巢综合征的影响

2.1 引言

2.2 实验材料

2.3 实验方法

2.4 实验结果

2.5 讨论

第三章 运动预防大鼠多囊卵巢综合征的机制

3.1 引言

3.2 实验材料

3.3 实验方法

3.4 实验结果

3.5 讨论

第四章 结论

4.1 运动干预对大鼠多囊卵巢综合征的影响和作用机制

4.2 全文总结

4.3 研究的局限与不足

参考文献

攻读硕士学位期间的学术成果

致谢