参附注射液对严重脓毒症大鼠促胃生长激素干预作用的机制研究

摘要

目的：观察参附注射液对脓毒症大鼠肠功能的影响。方法将40只大鼠按随机数字表法分为假手术组、脓毒症模型组、参附低浓度和高浓度组，每组10只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症大鼠模型，假手术组大鼠仅开腹而不行CLP。参附低、高浓度组大鼠于制模后10 min经尾静脉推注参附注射液5 mL/kg和10 mL/kg；模型组则推注生理盐水10 mL/kg。12 h后取血并处死大鼠，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清促胃生长激素（Ghrelin）、胃泌素及炎症介质肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、高迁移率族蛋白-B1（HMGB1）和髓过氧化物酶（MPO）、二胺氧化酶（DAO）活性；采用蛋白质免疫印迹法（Western Blot）法检测Ghrelin、胃泌素受体（GHSR）蛋白水平；光镜下观察肠黏膜组织病理学改变并行Chiu评分；采用原位末端缺刻标记法（TUNEL）检测肠黏膜上皮细胞凋亡指数（AI）。结果与假手术组比较，模型组血清Ghrelin、胃泌素含量明显减少〔Ghrelin（ng/L）：121.23±3.53比146.28±5.43，胃泌素（ng/L）：81.78±3.27比102.78±4.07〕， TNF-α、HMGB1含量明显增加〔TNF-α（mg/L）：93.71±3.66比11.69±1.44，HMGB1（mg/L）：76.25±4.12比22.41±3.08〕；肠组织DAO活性降低〔DAO（U/mL）：14.64±0.68比25.13±1.98〕，MPO活性升高〔MPO （mg/L）：175.98±6.95比45.64±4.48〕，Ghrelin、GHSR蛋白表达水平明显降低〔Ghrelin（灰度值）：0.12±0.02比0.23±0.04，GHSR（灰度值）：0.18±0.02比0.32±0.03〕；肠黏膜Chiu评分及回肠黏膜上皮细胞AI均明显升高〔Chiu评分（分）：3.90±0.52比0.30±0.30，AI：29.31±1.65比5.45±1.35，均P＜0.01〕。与模型组比较，参附低、高浓度组血清Ghrelin含量和肠组织中Ghrelin、GHSR蛋白表达水平均显著增加（P＜0.05或P＜0.01），肠组织DAO活性、Chiu评分及AI显著降低，且参附高浓度组的变化较参附低浓度组更显著〔Ghrelin（ng/L）：143.54±3.89比136.58±4.91，TNF-α（mg/L）：75.13±4.69比83.70±4.40，HMGB1（mg/L）：57.47±4.53比65.41±4.63，Ghrelin蛋白（灰度值）：0.18±0.03比0.15±0.03，GHSR蛋白（灰度值）：0.28±0.03比0.23±0.03， MPO（mg/L）：154.05±5.75比162.64±5.73，DAO（kU/L）：19.70±1.51比16.67±0.92，Chiu评分（分）：2.30±0.52比3.20±0.48，AI：20.38±1.34比26.40±1.32，均P＜0.05〕；而参附低、高浓度组血清胃泌素含量较模型组有所升高，但差异均无统计学意义（83.59±3.24、86.54±5.93比81.78±3.27，均P＞0.05）。光镜下可见模型组组肠黏膜绒毛破损、肿胀明显，有溃疡形成，血管周围出血明显，有中性粒细胞浸润，基底层断裂；参附组肠绒毛少量缺损，局限性坏死，少量出血，有少量中性粒细胞浸润。结论参附注射液可明显改善脓毒症模型大鼠异常的血清Ghrelin表达，降低血清TNF-α、HMGB1水平，减少肠组织MPO活性、提高DAO活性，减轻回肠黏膜的病理改变，减少回肠黏膜上皮细胞凋亡，且此作用强度与参附注射液剂量成正比。