菩人丹对T2DM大鼠胰腺微循环及β细胞分泌功能的影响研究

摘要

目的:
　　 对比研究正常大鼠和2型糖尿病大鼠胰腺微循环与胰岛内分泌细胞形态及分泌功能的关系，揭示“益气养阴，化瘀通络”之菩人丹超微粉改善胰腺微循环修复受损胰岛β细胞形态与功能的作用机制，为临床从胰腺微循环改善角度治疗2型糖尿病提供实验依据。
　　 方法:
　　 1.T2DM胰岛微血管损伤模型的建立:选用雄性Wistar大鼠，每日灌胃自制的脂肪乳，连续4周后，眶静脉取血，离心血清，测定血清胰岛素及空腹血糖值。正糖钳实验结合胰岛素敏感指数判定胰岛素抵抗程度，之后尾静脉快速注射链脲佐菌素，一周后眶静脉取血，测定空腹血糖(FBG)，将FBG≥11.1mmol/L的大鼠作为T2DM模型大鼠，同时测定血脂(TC、TG、LDL-c、HDL-c)含量。激光多普勒血流成像仪检测胰腺组织血流量，随机抽取部分实验动物作相应病理观察。
　　 2.选出成模大鼠随机分组，分别给与相应药物治疗4周后:
　　 (1)胰腺微血管铸型重建:观察实验组动物胰岛微血管的三维立体构筑特征、胰岛微循环引流通道的长度、管径以及与腺泡毛细血管网的联系特性。
　　 (2)胰组织血流量检测:激光多普勒血流成像仪观测胰腺局部微循环状态。
　　 (3)双重免疫组织化学染色:观察胰岛α、β细胞的形态、数量和分布;
　　 (4)透射电镜:观察胰腺组织的超微结构
　　 (5)葡萄糖-胰岛素释放试验:评价胰岛β细胞的分泌功能。
　　 结果:
　　 1.模型复制结果表现为:
　　 (1)出现典型的“三多一少”症状，即多饮、多食、多尿和体重减轻。
　　 (2)空腹血糖:FBG≥11.1mmol/L。
　　 (3)甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白水平显著升高(P＜0.01，P＜0.05)。
　　 (4)胰岛β细胞分泌功能降低，出现胰岛素抵抗。
　　 (5)胰岛内分泌细胞表现为:胰岛形态不规则，周界与外分泌部边界不清，胰岛内分泌细胞数量减少，形态异常。胰岛α细胞增生，分布由周边向中央扩散。β细胞数量减少，细胞萎缩，甚至凋亡，分布由中央向周边移位。
　　 (6)胰腺组织血流量及胰岛微血管表现为:胰组织血流量显著减少(P＜0.01，P＜0.05);胰腺小叶间动脉壁增厚，出现纤维样病变，周围小血管增生。
　　 2.菩人丹对T2DM大鼠胰腺微循环及胰岛内分泌细胞的影响:
　　 (1)胰腺微血管铸型情况:模型组实验大鼠微血管数量明显减少，微血管多表现为突然变细的盲端，微血管间的吻合减少，残存微血管长度变短，管径变细;菩人丹治疗组，胰腺微血管数量增多，长度、管径均显著增大。
　　 (2)胰组织血流量变化情况:模型组胰血流量明显低于空白组;菩人丹干预治疗组胰腺组织血流量较模型组显著增大(P＜0.05)。
　　 (3)胰岛内分泌细胞变化情况:胰岛α细胞染色呈红色，胰岛中央β细胞染色呈黄色。正常对照组:β细胞数量较多，细胞均匀、饱满;模型组:α细胞由周边向中央移位。β细胞减少，细胞固缩，由中央向周边移位;菩人丹治疗组:β细胞数量较模型组增多，β细胞分布均匀、饱满。
　　 (4)透射电镜观察胰岛β细胞超微结构:
　　 ①模型组:细胞核固缩变小，核仁模糊，异染色质边集;线粒体肿胀，嵴结构减少甚至消失，嵴粒脱落;分泌颗粒形状不规则，电子密度小，出现大量空泡化颗粒（无芯现象）。
　　 ②菩人丹治疗组:细胞核近似圆形，核仁清晰，异染色质未出现边集情况;线粒体及内质网形状及结构完整，嵴结构形成;分泌颗粒形状规则、内容物饱满，电子密度大。
　　 (5)胰岛β细胞分泌功能变化情况:
　　 ①模型组胰岛素的第一时相分泌峰出现在30min左右，滞后严重，且胰岛素分泌量较少;第二时相分泌峰几不可见;血糖值降低缓慢，处于高血糖状态。菩人丹治疗组各时相分泌峰基本符合胰岛素短脉冲和长脉冲的双峰分泌模型，且胰岛素分泌量较多。
　　 ②与模型组相比，菩人丹治疗组的Ins-AUC/Glu-AUC显著增大。
　　 ③模型组胰岛β细胞功能评估相关指数较空白组显著降低。与模型组相比，菩人丹治疗组:胰岛素分泌增加，胰岛β细胞功能指数提高，胰岛素敏感指数有所提高，受损的胰岛β细胞分泌功能有所改善。
　　 结论:
　　 1.灌胃脂肪乳并运用尾静脉快速推注链脲佐菌素复制2型糖尿病胰岛微血管损伤模型，稳定性和可重复性好，为理想模型。
　　 2.菩人丹超微粉可显著改善2型糖尿病微血管损伤大鼠胰腺微循环状态。
　　 3.菩人丹超微粉可有效修复受损胰岛β细胞形态，并能很好的修复受损胰岛β细胞的超微结构。
　　 4.菩人丹超微粉可有效提高胰岛β细胞的分泌功能。

目录

摘要

缩略词注释表

引言

第一章 前期研究基础

第一节 胰腺微循环与胰岛β细胞的关系研究进展

第二节 胰岛β细胞“质”、“量”的辩证关系

一、胰岛β细胞的“质”与“量”及“质"的三要素

二、胰岛β细胞的结构

三、“真” “假”胰岛素

四、胰岛素调节型分泌

第三节 中西药治疗2型糖尿病进展

结语

第二章 实验研究

第一节 2型糖尿病胰腺微血管损伤模型的建立及评价

一、前言

二、材料与方法

三、结果

四、附图

五、附表

六、讨论

七、小结

第二节 菩人丹超微粉对2型糖尿病大鼠胰腺微循环的影响研究

一、前言

二、材料与方法

三、结果

四、附图

五、讨论

六、小结

第三节 菩人丹对T2DM大鼠胰岛内分泌细胞形态及其超微结构的影响研究

一、前言

二、材料与方法

三、结果

四、附图

五、讨论

六、小结

第四节 菩人丹对T2DM大鼠β细胞分泌功能的影响研究

一、前言

二、材料与方法

三、结果

四、附图

五、讨论

结论

参考文献

附录

致谢

声明