土家药刺老苞根皮干预骨折愈合机制研究

摘要

目的:
　　 运用土家药刺老苞根皮水煎剂对SD大鼠胫骨定位打孔骨折模型进行干预，通过组织病理学、X-ray影像学、生物力学、骨密度、血清及骨生化学、分子生物学（血管内皮生长因子1、2蛋白表达）等技术较综合地评价其干预骨折愈合的疗效，并就其调控骨折愈合的机制作一初步的探索。
　　 方法:
　　 建立大鼠胫骨骨折模型后，随机分为模型组、刺老苞根皮高剂量组（以下简称高剂组）、刺老苞根皮中剂量组（以下简称中剂组）、刺老苞根皮低剂量组（以下简称低剂组）、伤科接骨片组（以下简称中药组）及左旋多巴组（以下简称西药组），另设空白对照组（以下简称空白组），每组50只。按照骨折愈合分期要求，各组再按观测时间点随机分成5个小组，每组10只，分别为4天组、7天组、14天组、21天组、28天组。除正常组和模型组灌服蒸馏水外，其他各组依次灌服:刺老苞根皮水煎剂高剂量、中剂量、低剂量、伤科接骨片混悬液、左旋多巴片混悬液。在各时间点末，处死，取血取材。依次通过HE染色和X-ray片观察组织形态学变化;ICP-MS检测骨矿物质元素;三点弯曲法测试右侧胫骨的生物力学;骨密度仪检测骨痂处骨密度;血清中碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(BGP)和羟脯氨酸(HYP)含量及骨总胶原蛋白含量测定;免疫组化技术检测Flt-1、Flk-1蛋白表达等相关试验。
　　 结果:
　　 1.组织形态学:骨折4天后，打孔边缘清晰;7天后，骨折部位形成成熟骨小梁;14天后打孔边缘不慎清晰;21天后打孔边缘模糊;28天后打孔边缘几近消失。刺老苞根皮不同剂量组骨组织愈合较模型组快，以高、中剂量组更为显著。修复速度与对照组相近。
　　 2.骨矿物元素指标:刺老苞根皮不同剂量组骨微量元素钙、磷、镁、铜、硒、锰含量均高于模型组，以高、中剂量组更为显著的（与对照组及模型组比较:P＜0.01）。
　　 3.血清生化及骨生化指标:刺老苞根皮不同剂量组与模型组比较，4天时无明显差异;7天～28天时，血清碱性磷酸酶活性升高，血清骨钙素、羟脯氨酸含量增加，骨总胶原蛋白含量增加，以高、中剂量组更为显著（与对照组及模型组比较:P＜0.01）。
　　 4.免疫组化结果:4天时，骨痂处Flt-1和Flk-1表达较少，各给药组与模型组相比有差异(P＜0.01，P＜0.05);7天～28天，骨痂处Flt-1和Flk-1表达增强，以7天时最强，各给药组与模型组相比有差异(P＜0.01，P＜0.05);刺老苞根皮不同剂量组表达较其他各组强。
　　 5.骨生物力学指标:胫骨结构力学和材料力学参数:挠度、载荷、应力、应变等参数，模型组与空白组比，差异显著(P＜0.01)。各给药组与模型组比，差异显著(P＜0.01)。
　　 6.骨密度:骨折后4天、各组BMD值无显著差异(P＞0.05)，7天、14天时高剂量组BMD值高于模型组(P＜0.01)，21天时，刺老苞根皮不同剂量组BMD值均高于模型组(P＜0.01)。28天时，各组BMD值无明显差异(P＞0.05)。
　　 结论:
　　 1.刺老苞根皮在骨愈合过程中能刺激骨生成细胞增殖分化，缩短骨痂形成时间，使骨修复提前进入重建期。
　　 2.刺老苞根皮在骨愈合过程中提高血清碱性磷酸酶活性及骨钙素、羟脯氨酸的含量，加速骨基质矿化，同时可增强骨总胶原蛋白含量。
　　 3.刺老苞根皮在骨愈合过程中不同程度的提高了骨缺损处Flt-1、Flk-1蛋白及mRNA的表达，加快骨愈合速度。这可能是刺老苞根皮促进骨折愈合的分子机制之一。
　　 4.刺老苞根皮在骨愈合过程中补充骨修复所需的锌、镁、铜、锰、钙、磷等微量元素，增加骨痂骨密度和生物力学强度，提高骨愈合质量。

目录

摘要

英文缩略词

引言

实验方法与技术路线：

第一章 刺老苞根皮干预骨折愈合组织形态学观察

第一节 材料和仪器

一、实验材料

二、实验仪器

第二节 实验方法

一、灌胃剂制备

二、动物分组

三、骨折模型建立

四、给药及取材

五、组织形态学观察

第三节 结果

一、X-ray扫描观察

二、HE染色

第四节 讨论

第五节 小结

第二章 刺老苞根皮对骨折模型大鼠新生骨痂微量元素含量的测定

第一节 材料和仪器

一、实验材料

二、实验仪器

第二节 实验方法

第三节 结果

第四节 讨论

第五节 小结

第三章 刺老苞根皮干预骨折愈合模型的血清及骨生化指标测定试验

第一节 材料和仪器

一、实验材料

二、实验仪器

第二节 实验方法

一、血清ALP活性测定

二、血清BGP测定

三、血清HYP含量测定

四、骨总胶原蛋白含量测定

第三节 结果

一、血清ALP活性结果

二、血清BGP含量测定结果

三、血清HYP含量测定结果

四、骨总胶原蛋白含量测定结果

第四节 讨论

一、成骨细胞活性

二、骨基质胶原蛋白代谢

第五节 小结

第四章 刺老苞根皮对骨折愈合血管内皮生长因子受体蛋白的影响

第一节 材料和仪器

一、实验材料

二、仪器

第二节 实验方法

一、免疫组化染色（S-P法）

二、图像分析

三、统计学方法

第三节 结果

一、骨痂处Flt-1表达情况

二、骨痂处Flk-1表达情况

第四节 讨论

第五节 小结

第五章 刺老苞根皮干预骨折愈合模型的骨痂骨密度(BMD)及骨痂生物力学测定试验

第一节 材料和仪器

一、实验材料

二、实验仪器

第二节 实验方法

一、骨密度测定

二、生物力学测试

第三节 结果

一、骨密度测定

二、生物力学测试

第四节 讨论

第五节 小结

结论

展望

参考文献

附录：

文献综述

X-ray扫描图片

HE染色图片

Flt-1免疫组化图片

Flk-1免疫组化图片

致谢

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