土贝母苷甲和皂苷抗肿瘤转移作用的研究

摘要

【研究背景与目的】 土贝母，[Bolbostemma paniculatum（Maxim.）Franquet(Cucurbitaceae)]是一种传统中药，载于清代赵学敏编著的《本草纲目拾遗》。古代用它的块茎来治疗乳岩、乳痈、乳腺增生和瘰疬等疾患，临床上显示出明显的散结毒、消痈肿效果。四川省和陕西省的老中医用它来治疗食道癌和胃癌，效果显著，但因恶心、呕吐等消化道副作用而限制了它的临床应用。我们从1978年开始从生药土贝母中分离、纯化抗癌活性成分土贝母皂苷 (以下简称皂苷，主要由土贝母苷甲和土贝母苷乙组成)，对其中得率最高（1.9％）、水溶性和稳定性较好的土贝母苷甲（以下简称苷甲）的药效学、药代动力学、毒理学进行了较系统的研究，并对皂苷的几种天然衍生物的构效关系进行了定量分析，结果发现土贝母苷乙是最有希望用于临床试验的化合物，但从增加得率（皂苷的得率约为2.4％）、简化工艺、降低成本和临床应用的角度而言，皂苷则是一个应该首先开发的产品。 以前我们的工作已经证明土贝母苷甲和皂苷具有抗肿瘤活性，且抗瘤谱广；还能将人宫颈癌细胞（HeLa）、人早幼粒白血病细胞（HL-60）阻滞在G2/M期,诱导人鼻咽癌细胞（CNE-2Z）凋亡；苷甲能抑制血管生成。 本实验通过土贝母苷甲和皂苷对黑色素瘤B16细胞体外侵袭转移影响的研究和皂苷对Lewis肺癌裸鼠移植瘤肝转移影响的研究，为开发临床抗肿瘤转移药物提供实验依据。 【方法】 1. MTT法检测苷甲和皂苷对B16细胞生长的影响； 2. MTT法研究苷甲和皂苷对B16细胞黏附的影响； 3. 体外基底膜侵袭实验研究苷甲和皂苷对B16细胞侵袭的影响； 4. 体外运动实验研究苷甲和皂苷对B16细胞运动的影响； 5. 动物实验观察皂苷对Lewis肺癌裸鼠移植瘤生长和肝转移的影响； 6. 免疫组化法检测皂苷对Lewis肺癌移植瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞因子（bFGF）、血小板衍化生长因子（PDGF）、增殖细胞核抗原（PCNA）表达和细胞表面黏附分子CD44v6、原癌基因c-erb-B2、抑癌基因nm23-H1表达的影响； 7. HE染色观察肿瘤组织形态学的变化。 【结果】 1. 苷甲和皂苷对B16细胞的生长有抑制作用，其效果与浓度相关，苷甲和皂苷作用6h的IC50分别为27μmol·L-1和32.6μmol·L-1； 2. 苷甲和皂苷对B16细胞的黏附、侵袭和运动有抑制作用； 3. 皂苷能够明显抑制Lewis肺癌裸鼠移植瘤生长和肝转移； 4. 皂苷能够降低Lewis肺癌裸鼠移植瘤组织中VEGF、bFGF、PCNA、PDGF的表达； 5. 皂苷能够降低Lewis肺癌裸鼠移植瘤组织中CD44v6、c-erb-B2的表达，增强nm23-H1的表达。 【结论】 土贝母苷甲和皂苷体外能够明显抑制B16细胞的黏附、侵袭和运动，体内能显著抑制Lewis肺癌裸鼠移植瘤的生长和肝转移。土贝母苷甲和皂苷具有作为抗肿瘤转移的药物的潜能。