霍乱肠毒素B亚单位在转基因番茄植物中表达的研究

摘要

该论文研究的目的是利用转基因植物的技术,获得能正确表达霍乱肠毒素B亚单位(CTB)的番茄,并希望制成在生食后能刺激粘膜免疫系统产生保护性抗体的疫苗.我们设计将霍乱肠毒素B亚单位(CT-B)基因转入番茄(L.esculentum,金丰一号)中表达,通过大量预试验建立了有效的番茄外源基因转化系统,并成功将CT-B基因转入番茄细胞中,获得了转基因植株,ELISA检测和Western杂交试验的结果表明CT-B基因在番茄中获得表达.高效的再生及转化系统是外源目的基因导入植物的前提,该研究采用叶盘法,需要考虑外植体的来源及种类、供体菌株、培养筛选条件等因素.对13株抗性植株提取基因组DNA,采用PCR和Southern杂交试验的方法,证实10株显示CT-B基因整合到番茄基因组DNA中.对植物表达抗原基因CT-B的应用前景及在植物中表达所存在的问题进行了详细的讨论.在试验过程中,对一些分子生物学试验方法进行了改进,如提高PCR产物亚克隆效率方法,根癌农杆菌中重组质粒的提取及酶切证实方法的改进.

目录

本论文常用英文缩词表

第一部分：前言

1.1植物基因工程的发展

1. 2利用转基因植物表达医用蛋白的研究进展

1.3预防感染性腹泻植物疫苗的研究概况

1.4本论文的目的意义及主要内容

第二部分：含CTB基因植物表达载体的构建

2.1材料和方法

2.2结果与讨论

第三部分：CTB基因在番茄中的转化与整合

3.1材料和方法

3.2结果与讨论

第四章：CTB基因在番茄中表达的检测

4.1材料和方法

4.2结果与讨论

讨论

结论

主要参考文献

附图

附录1 CTB基因(cDNA)核苷酸序列

附录2相关质粒图谱

附录3文献综述

2.转基因植物表达重组蛋白的研究进展

附录3已发表和修回的主要论文

后记