拉米夫定耐药患者的临床特点及耐药毒株的分子病毒学研究

摘要

随着以拉米夫定为代表的新一代核苷类似物在中国慢性乙型肝炎患者中的广泛应用,核苷类似物耐药成为目前临床关注的焦点问题.我们采用本室先前建立的RFLP方法筛检YMDD变异并将其应用于临床监测拉米夫定治疗过程中耐药性的产生,取得了较好的效果.由于RFLP的局限性,我们对筛检YMDD变异阳性的标本进行了P基因测序,以进一步了解拉米夫定耐药株的P基因A-E区序列特点.该研究中还有2例患者中分别因为P基因rtD83N和rtM204I变异导致HBsAg的表达提前出现终止,但患者仍表现为HBsAg阳性,说明在患者中这种提前终止的变异株均与野毒株同时存在.为进一步研究变异毒株的生物学意义,我们通过定向点突变,成功的在模板P3.8Ⅱ的基础上构建了五种P基因变异株,并在此基础上将包含不同突变点的全基因质粒通过磷酸钙转染的方法转染HepG2细胞.通过转染细胞上清的检测结果发现,五种不同的P基因变异株均可表达并分泌HBsAg和HBeAg,证明转染质粒在细胞内可正常表达和分泌,但五种变异株与野株相比,S/N值相差不多,说明这五种P基因变异对S基因表达的抗原并无明显影响.

目录

前言

第一部分拉米夫定耐药患者的临床学特点

1.材料与方法

2.结果

3. 讨论

第二部分拉米夫定耐药毒株的聚合酶基因序列特点

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第三部分乙肝病毒拉米夫定耐药毒株的全基因质粒构建及在HepG2细胞中复制与表达

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

参考文献

小结

致 谢