CD28分子在T细胞的表达及CD8CD28T细胞生物学特性的变化与心脏移植急性排斥反应的关系

摘要

首先,我们制作了大鼠腹腔异位心脏移植动物模型.该模型制作的成败是该系列实验成败的关键.在制作模型过程中,我们对供心的切取、受体的肝素化、腹腔血管的准备、心肌的灌注和保护及血管的吻合等进行了一系列操作技术的改进,使得制作模型简便快捷.在第二部分探索T细胞CD28分子的表达与心脏移植急性排斥反应的关系;T细胞是不均一的群体,根据其CD4和CD8分子的差别,可将成熟的T细胞分为CD4<'+>T和CD8<'+>T;CD4<'+>T也是不均一的群体,可以继续分为辅助性T细胞(Th)和迟发型超敏反应T细胞(TDTH)两个功能亚群;CD8<'+>T的功能亚群包括抑制性T细胞(TS)和杀伤性T细胞(CTL).静止的CD8<'+>T细胞以前体细胞的形势存在,在识别并结合APC表面抗原多肽-MHC-Ⅰ类分子复合物后,活化为抗原特异性的效应细胞.CD28分子主要表达在T细胞的共刺激分子,是T细胞激活的共刺激通路,激活的CD8<'+>T细胞主要是CD8<'+>CD28<'+>T细胞,起杀伤作用;CD8<'+>CD28<'->T则是作为抑制性T细胞而起作用的.该实验期望阐明CD28分子与急性排斥反应的内在关系.在第三部分探讨了起杀伤作用的CD8<'+>CD28<'+>T细胞生物学特性(包括钙离子浓度、膜电位、pH值)的变化与急性排斥反应的关系.实验是用荧光探针在T细胞内与钙离子、氢离子等结合,通过荧光强度的变化来证明细胞膜电位、钙离子浓度及pH值的变化.Fluo-3-AM产生的荧光强度与细胞内游离钙浓度成正比;BCECF-AM根据细胞内酸度不同发出不同强度的荧光,根据荧光强度可知细胞内氢离子变化趋势;DiBAC4(3)是膜电位敏感的亲脂性阴离子荧光染料,根据其在细胞内外的重新分布可判断出细胞膜电位的变化,DiBAC<,4>(3)进入细胞多,荧光增强,表明细胞膜电位出现去极化变化.根据三种荧光不同强度来检测细胞内的膜电位、钙离子浓度及pH值的变化.

目录

缩略词表

前 言

第一部分：大鼠异位心脏移植动物模型制作

一材料与方法

二结 果

三讨 论

四结 论

第二部分：CD28分子在大鼠外周血CD4+T、CD8+T细胞的表达与心脏移植急性排斥反应的关系

一材料与方法

二结 果

讨 论

结 论

第三部分：CD8+CD28+T细胞钙离子浓度、膜电位、PH值的变化与急性排斥反应的关系

二材料与方法

二结 果

三讨论

四结 论

全文结论

参考文献

综 述淋巴细胞钙通道及细胞内钙离子的研究进展

学习期间发表的文章及参编的专著

附照片

致 谢