NHL石蜡包埋组织免疫球蛋白基因重排PCR检测条件的优化

摘要

随着分子生物技术的发展和人类基因组测序工作的完成,将该技术进一步完善并及早运用于临床已势在必行.出于此目的,该研究以石蜡组织为主要研究对象,从免疫球蛋白(Ig)基因重排引物分析和设计、引物条件的摸索、石蜡包埋组织DNA的提取、引物在淋巴瘤石蜡组织中的重排测定比较等诸方面,对Ig基因重排PCR检测的条件进行了优化和探索.1.①用Clustal W软件,将常用的15余对用于Ig重链和轻链基因重排检测的引物与免疫球蛋白基因组中相应区域基因片段进行比较和分析.②用Primer Premier5.0软件对引物结构进行了分析和优化.2.①通过检测DG75和Jurkat淋巴瘤细胞的基因重排,将15对引物的条件进行优化和选择.②对PCR重排产物进行了测序和分析.3.用21例淋巴相关石蜡组织,通过测定DNA含量和观察PCR结果等方法,比较了消化法、酚抽提法和试剂盒法对石蜡组织DNA提取效果.4.用8对(Ig7对和TCR<,γ>1对)基因重排引物,对144例(B淋巴瘤113例、T淋巴瘤24例、淋巴结反应性增生7例)石蜡组织的基因重排进行了检测.

目录

前 言

第一部分lg基因重排引物的分析与设计

第一节重链引物的分析与设计

方法

结果

讨论(1)

第二节轻链引物的分析与设计

小结

第二部分引物条件的优化及对淋巴瘤细胞基因重排的测定

材料

方法

结果

一、Mg2+浓度对PCR反应的影响 见图2-1

二、引物浓度对基因重排结果的影响

三、IgH重排引物对DG75细胞重排温度梯度检测的结果

四、轻链重排引物对DG75细胞重排温度梯度检测的结果 见表2-3。

五、TCRγ通用引物PT的温度梯度结果

六、测序结果分析

讨论

小结

第三部分石蜡包埋组织DNA提取方法的比较

材料

方法

结果

讨论

小结

第四部分淋巴瘤石蜡包埋组织基因重排的检测

材料

方法

结果

讨论

小结

全文总结

主要参考文献

附录一:在读前期工作总结

附录二:综述

附录三:引物FR33-JH3测序序列比对结果(经节选整理)

1.P2短片段1-FR33-JH3-92bp Blast结果

2.P2短片段2-FR33-JH3-146bp

3.P2长片段-FR33-JH3-536bp

附录四:英文缩略词对照表

附录五:文中涉及到的淋巴瘤分类名缩写

在读期间撰写与课题相关论文等情况

致谢

附录