广州管圆线虫半乳凝素基因的克隆表达、蛋白纯化及免疫反应性研究

摘要

广州管圆线虫病(Angiostrongyliasjs)是由广州管圆线虫(Angiostrongyluscantonensis)感染而引起的。作为一种新发的食源性传染性疾病，广州管圆线虫病在全球的流行都呈现出上升的趋势，对人类的威胁也越来越大。广州管圆线虫主要侵犯中枢神经系统，引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎或脑膜脑炎。患该病后，绝大多数患者有头痛、肌肉痛、恶心、呕吐、感觉异常、触摸痛、发热、畏光、视力模糊、嗜睡、颈硬等症状。其中以头痛最突出，患者自诉“头痛欲裂”或忍受不了；全身疼痛、皮肤过敏的现象也比较严重；个别病人还会出现精神病样症状。我国是广州管圆线虫病的主要流行区之一，近几年的发病数逐渐增多，甚至出现了爆发流行。如何有效地防治广州管圆线虫病已成为亟待解决的重要问题。 在广州管圆线虫病的防治工作中，诊断是关键。诊断明确，治疗及时，则病人的转归一般良好。但目前国内外都还缺乏敏感特异、能产业化生产、标准化的诊断试剂盒。针对目前这个难点问题，本论文进行了以下研究： 一、广州管圆线虫半乳凝素基因的获取及生物信息学分析应用EST策略，从广州管圆线虫脑期幼虫cDNA文库中克隆了半乳凝素基因(AcGal)的全长cDNA序列，并已在GenBank中登录(登录号为DQ384534)。AcGal基因与秀丽杆线虫半乳凝素-10 高度同源。从保守结构域的搜索结果可知，AcGal具有半乳凝素结构域，该结构域能专一性地与β-半乳糖苷结合，如乳糖，而不需要金属离子的活化。半乳凝素以二聚体或三聚体结构域存在。 二、广州管圆线虫半乳凝素基因在大肠杆菌中的表达及免疫反应性分析PCR扩增AcGal cDNA全长序列后克隆入pET32a(+)载体进行诱导表达，包涵体经洗涤、变性、逐步透析复性，浓缩后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹。AcGal基因在大肠杆菌中以包涵体的形式表达，表达产物与感染广州管圆线虫的大鼠血清有明显的免疫反应性，具有诊断用抗原的应用前景。 综上所述，本研究利用本室构建的广州管圆线虫幼虫cDNA文库首次筛选克隆了广州管圆线虫半乳凝素的全长cDNA序列，并通过进一步的研究发现其重组蛋白是一种具有诊断潜力的抗原。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一章广州管圆线虫半乳凝素基因的获取

1材料

2方法

3结果

4讨论

5小结

第二章广州管圆线虫半乳凝素基因的表达、蛋白纯化及免疫反应性研究

1材料

2方法

3结果

4讨论

5小结

全文总结

参考文献

附篇 广东部分地区福寿螺体内广州管圆线虫感染的初步调查

1材料

2方法

3结果

4讨论

5小结

致谢

参考文献

附录

致谢