利用拟微绿球藻(Nannochloropsis sp.)生产富含n-3PUFA鸡蛋及其机理研究

摘要

本论文通过3个试验研究利用拟微绿球藻(NS)生产富含n-3 PUFA鸡蛋及其机理。首先评定NS的营养价值，然后通过养殖试验评价不同NS添加水平对蛋鸡生产性能、蛋品质的影响，同时研究蛋黄中n-3 PUFA沉积规律。最后采用iTRAQ方法，结合蛋白质组学、生物信息学等方法，鉴定肝脏中差异蛋白质，探讨EPA在蛋鸡肝脏中相关代谢通路及机制。
　　试验一拟微绿球藻营养成分测定及代谢能预测
　　NS的CP、EE含量分别为51.85％、8.01％，Ash、Ca、TP含量分别为6.17％、0.29％、1.15％，Lys、Met含量分别为3.08％、0.96％;另外，NS还富含β-胡萝卜素（860 mg/kg）、n-3 PUFA(主要EPA，无DHA)，根据营养成分预测的NS代谢能为2808 kcal/kg（或11.75 MJ/kg）。因此，从营养成分来看，NS营养成分优于玉米、豆粕等常规饲料原料，是一种高能量高蛋白质营养价值高的畜禽饲料，可做为潜在的功能性饲料原料添加到畜禽饲粮中。
　　试验二饲粮中添加拟微绿球藻对蛋鸡生产性能、蛋品质的影响
　　选取432只健康、产蛋率和体形相近的37周龄罗曼蛋鸡，随机分为6组，每组6个重复，每重复12只鸡。饲粮采用玉米-豆粕型基础饲粮，试验饲粮分别添加0(对照组，CON)、1％、2％、4％、8％ NS（微藻组，NSG）和8％亚麻籽（亚麻籽组，FSG）。试验期为4周。结果表明:1)与CON相比，各NSG、FSG的生产性能、蛋品质及蛋黄成分均无显著性差异(P＞0.05);但贮存时间可显著降低鸡蛋哈氏单位和蛋白高度(P＜0.05)，且NSG8、FSG的降低程度高于CON(P＜0.05);各NSG蛋黄颜色评分显著高于CON、FSG，且第7天左右即可达到饱和。2）与CON相比，各NSG和FSG蛋黄n-3 PUFA含量均显著提高(P＜0.05)，n-6 PUFA显著降低(P＜0.05)，并显著降低n-6/n-3(P＜0.05);NSG8蛋黄中DHA和n-3 PUFA含量可达到111.62和148.59 mg/egg;且第13天蛋黄中DHA、n-3 PUFA及LC-PUFA含量均富集饱和。3）通过感官评定，NSG8蛋黄颜色和蛋清弹性评分均高于CON、FSG(P＜0.05)，但蛋黄腥味、硬度评分也显著高于CON、FSG(P＜0.05);通过喜好度调查，NSG8蛋黄颜色和口感受到人们的喜欢，气味和味道并不受到人们喜欢，可能是由于鸡蛋的腥味所影响，但这并不影响其整体的喜好度。
　　试验三饲粮中添加拟微绿球藻对蛋鸡肝脏蛋白质表达的影响
　　选取37周龄健康、产蛋率和体形相近罗曼蛋鸡144只，随机分为2组，每组6个重复，每重复12只鸡。饲粮采用玉米-豆粕型基础饲粮，试验饲粮分别添加0（对照组，CON）、4％ NS（微藻组，NSG）。试验4周，采取蛋鸡肝脏组织，利用iTRAQ方法对蛋鸡肝脏进行蛋白质组学分析，结果显示，CON和NSG4组蛋鸡肝脏中共鉴定205个表达差异蛋白，其中有88个蛋白上调和117个蛋白下调。通过差异蛋白KEGG代谢通路分析，结果富集得到8条相关的代谢及信号传导通路，其中过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)信号通路是联结各种代谢过程的重要信号传导途径，在肝脏脂肪酸转运代谢过程中起着重要作用。在蛋鸡肝脏中，脂肪酸、类二十烷酸等可做为PPARα的配体，PPARα与维甲酸X受体(RXR)结合形成二聚体复合物，可以调控参与脂肪酸转运、氧化、降解等脂肪酸代谢过程中相关基因的表达，表达出相应功能的蛋白，参与肝脏中脂肪酸一系列的代谢过程。差异蛋白定量分析表明，肝脏中卵黏蛋白(Ovomucoid)和卵清蛋白(Ovalbumin)表达量下调，这可能从分子水平上解释NSG组的鸡蛋蛋白高度和哈氏单位降低以及不易贮存的原因。

目录

声明

摘要

英文缩略表

第一章 引言

1．1．2 n-3 PUFA对人体保健作用及摄食推荐量

1．1．3 家禽体内n-3 PUFA消化代谢及转化

1．1．4 富集n-3 PUFA鸡蛋的研究进展

1．2 微藻营养价值及在饲料添加剂中的应用

1．2．1 微藻营养价值

1．2．2 微藻添加剂在动物饲料中的应用

1．3 蛋白质组学及其在动物体脂质代谢研究的应用

1．3．1 蛋白质组学简介

1．3．2 有关n-3 PUFA蛋白组学的研究

1．4 展望

1．5 研究目的、内容及技术路线

1．5．1 研究目的

1．5．2 研究内容

1．5．3 研究技术路线

第二章 拟微绿球藻营养成分测定及代谢能预测

2．1 材料与方法

2．1．1 试验材料

2．1．2 测定指标与方法

2．1．3 代谢能的预测

2．2 结果与讨论

2．2．1 NS的营养成分

2．2．2 NS脂肪酸组成及含量

2．2．3 NS氨基酸含量

2．2．4 NS代谢能的预测

2．3 小结

第三章 饲粮中添加拟微绿球藻对蛋鸡生产性能和蛋品质的影响

3．1 材料与方法

3．1．1 试验材料

3．1．2 试验设计与饲粮

3．1．3 饲养管理

3．1．4 样品采集与处理

3．1．5 测定指标与方法

3．1．6 数据统计分析

3．2 结果与分析

3．2．1 生产性能

3．2．2 蛋品质及蛋黄成分

3．2．3 蛋黄中脂肪酸组成及含量

3．2．4 蛋黄中n-3 PUFA富集规律

3．2．5 鸡蛋感官评定

3．3 讨论

3．3．1 生产性能

3．3．2 蛋品质及蛋黄成分

3．3．3 蛋黄中脂肪酸组成及含量

3．3．4 蛋黄中n-3 PUFA富集规律

3．3．5 鸡蛋感官评定

3．4 小结

第四章 饲粮中添加拟微绿球藻对蛋鸡肝脏蛋白质表达的影响

4．1 材料与方法

4．1．1 试验动物及饲养管理

4．1．2 样品采集及处理

4．1．3 试验试剂与仪器

4．1．4 试验方法及流程

4．1．5 差异蛋白生物信息学分析

4．2 结果与分析

4．2．1 样品总蛋白质浓度及质量检测

4．2．2 肝脏组织蛋白鉴定及定量

4．2．3 差异蛋白的筛选及分类

4．2．4 差异蛋白GO功能分析

4．2．5 差异蛋白KEGG代谢通路富集分析

4．3 讨论

4．3．1 iTRAQ方法的选择

4．3．2 差异蛋白注释

4．3．3 差异蛋白参与的代谢通路

4．4 小结

第五章 全文结论

5．1 主要结论

5．2 创新点

5．3 有待于进一步研究的问题及不足

参考文献

附录

致谢

作者简历