烟草花粉及花粉管类钙通道蛋白的生化鉴定与细胞免疫定位

摘要

该工作旨在用免疫化学方法对花粉和花粉管中可能存在的类动物细胞钙通道蛋白进行定位,从而为钙通道的存在提供证据,并为进一步研究植物细胞钙通道的分子结构及其在花粉萌发和花粉管生长过程中的调控机制奠定基础.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹的实验证明,烟草花粉和花粉管膜系统中存在分别与大鼠电压门控型钙通道的主要功能单位--α<,1B>(N型钙通道)、α<,1C>和α<,1D>(L型钙通道)亚基相类似的多肽.以冰冻切片为材料进行免疫荧光定位,提示类α<,1B>、类α<,1C>、类α<,1D>亚基主要以分散的颗粒状分布于花粉内部结构中.对不同阶段的花粉或花粉管中不同细胞器膜及质膜上的金颗粒密度的定量分析表明,这三种多肽的分布及其密度均随花粉萌发和花粉管生长发生相应变化.该工作的实验结果初步表明,类α<,1B>、类α<,1C>、类α<,1D>亚基存在于烟草花粉和花粉管中,并且可能参与了花粉萌发和花粉管生长的调控过程.

目录

英文缩写表

第一章文献综述

一、钙通道

1钙通道概述

2植物细胞钙通道研究进展

二 Ca2+在花粉萌发和花粉管生长中的作用

1花粉和花粉管内胞质自由Ca2+的极性分布

2形成和维持花粉管顶端Ca2+梯度的可能机制

三本研究的目的与意义

第二章材料与方法

一、实验材料

二、化学试剂与主要仪器

1化学试剂

2主要仪器

三、实验方法

1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹

2免疫荧光定位及激光共聚焦扫描显微镜观察

3免疫金标及电子显微镜观察

4动物钙通道α1亚基与拟南芥可能钙通道氨基酸序列似性比较

第三章结果与分析

一、花粉和花粉管中类α1亚基的免疫印迹鉴定

二、花粉和花粉管中类α1亚基的免疫荧光定位

1花粉原生质体中类α1亚基的免疫荧光定位

2花粉与花粉管冰冻切片中类α1亚基的免疫荧光定位

三、花粉和花粉管中类α1亚基的免疫金标及电镜观察

1类α1B亚基

2类α1C亚基

3类α1D亚基

4类α1A亚基与类α1E亚基

5类α1亚基分布密度在花粉萌发和花粉管生长过程中的变化

四、动物钙通道α1亚基与拟南芥可能钙通道氨基酸序列相似性比较

第四章讨论

一、几种显微标记方法的比较

二、烟草花粉中存在类α1亚基

三、类α1亚基在花粉和花粉管中的分布及可能作用

第五章结论与展望

一、结论

二、展望

参考文献

致谢