水稻抑制衰老嵌合基因的遗传转化及多基因共转化的研究

摘要

利用基因枪法将抑制衰老的嵌合基因PSG529转入籼稻,PCR、点杂交和Southorn杂交证明,外源基因已整合到水稻基因组,对PSG529转基因植株的细胞分裂素含量、叶绿素含量测定证明,衰老特异启动子在转基因水稻中启动,基因得到表达.对成熟胚愈伤组织和幼胚愈伤组织转化效率进行了比较,未发现明显差别,但幼胚愈伤组织筛选频率较高,成熟胚愈伤组织取材料不受季节限制,简便易行.干燥处理有利于提高愈伤组织分化率.利用基因枪法将质粒pIP101,pIP840,JPM002以1:1混合导入粳稻,结果表明,潮酶素筛选效果较好,基本没有非转化细胞的逃逸现象发生,除标记基因外,各基因的整合频率差异不明显,三基因的共整合频率较高.

目录

缩略词表

1前言

1.1转化方法

1.2标记基因与报告基因

1.3外源基因的表达和遗传

1.4植物抑制衰老的基因工程

1.5多基因共转化的遗传操作

1.6立题依据

2材料和方法

2.1水稻品种

2.2培养基

2.3外植体的获取

2.4质粒

2.5质粒DNA导入宿主细胞

2.6基因枪转化

2.7水稻总DNA的提取

2.8对抗性筛选基因NPTII、HPT的PCR扩增

2.9分子杂交

2.10细胞分裂素含量的测定

2.11叶绿素含量的测定

3结果与讨论

3.1水稻基因型的筛选

3.2筛选和再生

3.3影响转化效率的因素

3.4各品种的筛选效果和分化情况

3.5抗性植株的获得及分子检测

3.6生物学检测

3.7多基因共转化的整合情况分析

4结论

参考文献

致谢