食用菌中HIV-1反转录酶和蛋白酶抑制剂的分离与纯化

摘要

该论文测定了多种食用菌多糖复合物对反转录酶(RT)和蛋白酶(PR)的抑制作用.实验结果表明,对HIV-1 RT有抑制作用的组分主要集中在乙醇沉淀部分,即多糖复合物部分.其中以茯苓的活性最高,1mg/ml的反应浓度下抑制率达97.4％,其次是香栓菌90.6％和茶树菇84.5％.选取活性最高的茯苓菌丝体多糖复合物来作为纯化对象,经过DEAE-纤维素阴离子交换层析,CM-纤维素阳离子交换层析和FPLC Superdex 75凝胶过滤方法分离纯化后,获得一种对HIV-1 RT具有高抑制活性的糖蛋白S12,并测出其蛋白部分N末端的5个氨基酸顺序:丙氨酸—谷氨酸—天冬酰胺—甘氨酸—甘氨酸.在已测的22种食用菌多糖复合物对HIV-1 PR的抑制活性实验中,反应浓度为0.5mg/ml下对蛋白酶抑制活性最高的是香乳菇,其抑制率达80.9％.

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第一章文献综述

1.1人免疫缺陷病毒(HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS,HIV)

1.1.1 HIV的分类地位

1.1.2 HIV病毒粒子的结构

1.1.3 HIV基因组

1.1.4 HIV的生活周期

1.1.5 HIV-1复制中的3种关键酶

1.2抗HIV治疗及其疫苗的研究进展

1.2.1阻断病毒吸附和侵入

1.2.2病毒反转录酶和蛋白酶活性的抑制剂

1.2.3HIV疫苗

1.3食用菌的药用价值

1.3.1抗肿瘤作用

1.3.2抗病毒作用

1.3.3降血脂作用

1.3.4免疫调节作用

1.4生物大分子的分离与纯化

1.5本研究的目的和意义

第二章HIV-1反转录酶抑制剂的分离与纯化

2.1材料

2.1.1供试菌种

2.1.2培养基和试剂

2.1.3实验仪器

2.2方法

2.2.1材料准备

2.2.2多糖复合物的制备

2.2.3反转录酶活性测定

2.2.4从茯苓水溶性多糖中分离纯化HIV-1反转录酶的抑制剂

2.3结果与分析

2.3.1供试菌多糖复合物抑制HIV-1 RT活性的测定

2.3.2从茯苓水溶性多糖复合物中纯化HIV-1 RT的抑制剂

2.4讨论

2.4.1材料的选择

2.4.2 HIV-1 RT抑制剂的纯化

2.4.3前景展望

第三章HIV-1蛋白酶的提取与抑制剂的初步筛选

3.1材料

3.1.1菌种

3.1.2供试样品

3.2.3培养基和试剂

3.2方法

3.2.1重组HIV-1蛋白酶的表达

3.2.2重组HIV-1蛋白酶的提取和纯化

3.2.3重组HIV-1蛋白酶的复性

3.2.4重组HIV-1蛋白酶的活性测定

3.3结果与分析

3.3.1重组HIV-1蛋白酶活性检测

3.3.2食用菌水溶性多糖复合物对HIV-1 PR的抑制活性

3.4讨论

参考文献

致谢