鸡组织特异性表达载体的构建和转基因研究

摘要

与哺乳动物乳腺生物反应器一样,鸡输卵管生物反应器在生物制药以及农业生产领域有着广阔的应用前景.该实验对鸡输卵管组织特性表达载体的构建、转基因整合及表达的检测进行了研究.1.核基质附着区(MARs)和长末端重复序列(LTR)在真核生物的生命活动中具有极其重要的生物功能.MARs能形成相对独立的结构功能单位,调节基因的复制、转录和表达;LTR不但提供了整合所必须的末端,而且提供了转录和转录后处理的信号.为了在禽类转基因技术上研究上核基质附着区(MARs)与长末端重复序列(LTR)对外源基因的整合与表达的调控作用,构建了以下真核表达载体:(1)将MARs接入载体pEGFP-N1的CMV IE上游,得到中间载体pEGFP-MARs,然后再将LTR分别接入中间载体pEGFP-MARs的MARs序列上游与SV40-polyA下游形成真核表达载体载体pEDLM;(2)将MARs接入载体pOVALG的Oval-promotor上游,得到中间载体pOVALG-MARs,再将LTR分别接入中间载体pOVALG-MARs序列上游与SV40-polyA下游形成真核表达载体pEODLM.2.将用Lipofectin包装好的质粒pEGFP-N1、pEDLM、pEOVALG、pEODLM注入白来航鸡X期胚盘,并敷以G418筛选,分别对8-12日龄、13-22日龄的死胚和孵出的小鸡中用PCR和Southern的方法对外源基因的整合进行检测,结果证明LTR和MARs对于外源基因的整合率的提高是有效的;用RT-PCR的方法对外源基因的转录进行检测,结果发现部分阳性.

目录

文摘

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文献综述

第一部分转基因动物与生物反应器

1.转基因动物的定义和发展

2.转基因动物的应用

3.转基因动物研究方法

4.转基因动物的检测

第二部分转基因鸡的研究进展

1.鸡输卵管生物反应器的意义

2.鸡的生理学业特征

3.转基因鸡研究方法

4.禽类转基因研究存在的问题

第三部分核基质附着区(MARs)与基因表达

1.MARs的发现及其特性

2.MARs与核基质的相互作用

3.MARs与基因表达

4.其他与基因表达有关的调控元件

5.LTR与外源基因整合

实验部分

第一部分鸡输卵管组织特异性真核表达载体的构建

1.立题意义

2.材料和方法

3.结果与分析

4.讨论

第二部分脂质体介导的胚盘操作制备转基因鸡及检测

1.立题依据

2.材料和方法

3.结果

4.讨论

结论

参考文献

致谢