鸭MHCⅠ类分子cDNA克隆及其基因组结构

摘要

为了深入研究鸭MHC分子,该研究根据人,鼠,鸡等的MHCⅠ的序列比对设计了一对简并引物,之后进行RT-PCR扩增了一段鸭的MHCⅠ类分子α<,2>区基因(Anpl-MHCⅠ),然后利用这一段已知基因设计引物,结合3'-RACE和cDNA PCR Library方法克隆了Anpl-MHCⅠ基因,并对其基因组结构进行了分析.Anpl-MHCⅠ基因共编码344-355个氨基酸;基因组由八个外显子和七个内含子组成.根据遗传关系,克隆得到的6个Anpl-MHCⅠcDNA序列可以分为4个类型(Anpl-UAA-Anpl-UDA).采用Wu-kabat的方法分析显示在多肽结合区域内有28个高置换率的氨基酸位点.Anpl-MHCⅠ的氨基酸序列中保留了人HLA-A<,2>与抗原多肽结合的8个关键性氨基酸,其相互间的同源率为83.6﹪-88.5﹪,与鸡MHCⅠ(B-FIV21,B-FIV2,Rfp-Y)的同源率为55.2﹪-64.6﹪,与哺乳动物MHCⅠ的同源率为40.3﹪-42.8﹪.这表明与鱼类、鸟、蛙相比,Anpl-MHCⅠ更接近于人的MHCⅠ序列.与人HLA-A<,2>多肽结合区域的晶体结构比较,Anpl-MHCⅠ共有4个区域有插入和缺失变异.MHCⅠ的分子进化树揭示了鸭与其它动物间的进化关系.巢式PCR检测Anpl-MHCⅠ在脑、心、肾、脾、肠和法氏囊中都有表达.该研究为进一步研究鸭MHC分子及其与疾病的关系奠定了基础.

目录

文摘

英文文摘

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前言

1.MHC的结构

2.MHC抗原递呈作用

3.MHC分子的多态性

4.MHC分子与疾病的关系

5.家禽的MHC研究

6鸭MHC Ⅰ类类分子基因研究的意义

第一部分Anpl-MHC Ⅰ cDNA的克隆

1.材料

2.方法

3结果与分析

4讨论

第二部分Anpl-MHC Ⅰ基因组DNA的克隆

1.材料与方法

2结果与分析

3讨论

第三部分Anpl-MHC Ⅰ等位基因的克隆

1.材料与方法

2.结果与分析

3讨论

第四部分Anpl-MHC Ⅰ基因在组织中表达的研究

1.材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

结论

参考文献

附录主要仪器设备

致谢