利用显微注射技术制备大片段基因和双基因转基因小鼠

摘要

DNA显微注射技术虽然因为相对低效、整合随机等问题受到很多争议，但此技术具有对所转基因片段大小无限制，可同时实现多基因注射和转基因不用标记等优势，使其仍是制备转基因动物最为广泛的技术。转基因小鼠对于建立人类疾病模型，揭示发病机理，探索治疗途径具有十分重要的意义，同时转基因小鼠在真核生物基因表达调控机制的研究以及外源基因在大家畜整合表达的预测等方面发挥着重要作用，所以制备转基因小鼠有着重要的研究意义。本实验以显微注射技术制备了大片段基因和双基因转基因小鼠。 制备大片段转基因小鼠时是以BAC为载体的140kb人乳铁蛋白基因(Humanlactoferrin.hLF)为目的基因进行的显微注射，注射了1840枚原核期受精卵，移植了80只受体，出生111只子鼠，检测得到10只阳性鼠，出生率为50％，阳性率为9.0％，与以质粒为载体的小片段转基因相比较，出生率和阳性率均没有显著差异。阳性原代鼠中有7只将所转基因遗传给了后代，3只未将所转基因遗传给后代。从阳性原代鼠整合目的基因的完整性分析得出，除两只不完整外其余阳性鼠均整合了完整的目的基因。 制备双基因转基因小鼠时是以肾综合征出血热(HemorrhagicFeverwithRenalSyndrome,HFRS)抗体的重轻链基因和岩藻糖转移酶2，3(fucosyltransferases2,3,FUT2,3)基因为目的基因进行的显微注射。其中制备HFRS抗体的重轻链基因的转基因小鼠时注射1350枚原核期受精卵，移植了60只受体，出生了75只子鼠，检测得到6只双基因共整合阳性鼠，阳性率为8％，重链基因整合鼠12只，比率16％。轻链基因整合鼠6只，比率8％。在制备岩藻糖转移酶2，3(FUT2，FUT3)基因的转基因小鼠时，注射1050枚原核期受精卵，移植了42只受体，出生了80只子鼠，得到9只共整合阳性鼠，阳性率为11.3％，FUT2基因整合鼠11只，比率13.8％。FUT3基因整合鼠13只，比率16.3％。共注射均得到了共整合的转基因阳性鼠。共注射双基因共整合的效率不低于仅整合单基因的效率；共注射双基因的整合效率与单基因注射整合效率没有差异。对于HFRS抗体基因阳性鼠的传代显示共整合基因在子一代出现了分离，而岩藻糖转移酶基因阳性鼠传代显示子一代阳性鼠双基因均未发生分离。

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文摘

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第一部分文献综述

第二部分实验部分

参考文献

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