南瓜糖肽和木葡聚糖的分离纯化及其功能研究

摘要

南瓜是重要的药食两用植物，含有多种生理活性组分。文献表明，南瓜及其提取物具有降血糖，降血压，抗肿瘤，抗微生物，免疫调节，消炎镇痛及驱虫等功效。其中，广泛的研究工作聚焦在南瓜的降血糖功能上，几种降血糖南瓜多糖被提取并测定了其理化和功能性质。但是，南瓜中糖肽的分离及性质研究未见报道，南瓜经水提取后的残渣也未得到利用。 本论文首先从南瓜中分离纯化了一个新的南瓜糖肽，测定了其理化性质，优化了其提取工艺；然后，又从经水提取后的南瓜果渣中提取了木葡聚糖，完成工艺优化；最后，研究了南瓜中这两个功能组分的降血糖活性。实验结果如下： (1)采用缓冻预处理，热水提取工艺制备南瓜粗多糖，运用响应曲面研究了液料比(x1)、提取温度(x2)和提取时间(x3)对南瓜水提多糖得率的影响，确定了热水浸提的最佳工艺参数为：液料比为13.9：1，提取温度为65.2℃，提取时间为7.8小时。运用R2，p水平和学生氏-t检验进行拟合度和显著性检验，影响最显著的是液料比的平方项(x1x1)，随后是提取时间(x3)和提取温度的平方项(x2x2)。x1x1对应的t值为-6.6075，p水平为0.0001，而x3和x2x2的t值分别为-4.1960和2.2503，p水平为0.0018和0.0482。按优化工艺进行验证实验，多糖得率为6.7％，优化工艺合理。 (2)运用DEAE-SepharoseFastFlow(20cm×2.6cm)离子交换层析从水提南瓜粗多糖中纯化南瓜糖肽，并用HPLC测定其纯度。纯化条件为：100mg多糖溶于7m10.05mMpH7.8磷酸缓冲液中，上柱，用120m10.05mMpH7.8磷酸缓冲液洗脱，然后用150ml0～0.5MNaCl缓冲液梯度洗脱，最后用120ml含0.5MNaCl缓冲液洗脱，流速1.2ml/min，自动部分收集4分钟/管，得到糖肽峰PBPP1，PBPP2。用HPLC进行纯度鉴定，PBPP2为均一糖肽。运用HPLC测定PBPP2的分子量为9.19*106Da，单糖组成和摩尔比为甘露糖：阿拉伯糖=1∶2。运用氨基酸分析仪测定了组成PBPP2的18种氨基酸。 (3)南瓜水提后的残渣用浓碱提取了木葡聚糖。运用响应曲面方法研究了液料比(x1)、NaOH浓度(x2)和提取时间(x3)对南瓜木葡聚糖得率的影响，并优化了木葡聚糖的提取工艺。运用R2，p水平和学生氏-t检验进行拟合度和显著性检验，最显著因素为x1x1,然后是x2x2和x2，其t，p值分别为-16.2435，0.00000002；-13.8831，0.00000007和-12.1694，0.00000026。最佳提取工艺为：液料比20.1∶1；NaOH浓度2.7M；提取时间12.6小时。验证实验表明，优化工艺合理。 (4)动物实验研究南瓜糖肽PBPP2的降血糖功能。结果表明，连续10天灌胃给予南瓜糖肽PBPP2和木葡聚糖，大剂量(400mg/kgb.w.)南瓜糖肽PBPP2组血糖值(7.18±3.59)显著(P＜0.01)低于模型组血糖值(11.89±3.70)，大剂量(400mg/kgb.w.)木葡聚糖组血糖值(6.18±2.68)极显著(P＜0.001)低于模型组血糖值(11.89±3.70)。而小剂量组则都不具有降血糖活性。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章文献综述

第二章立题思路

第三章南瓜水提多糖的热水提取工艺优化

第四章南瓜糖肽的纯化及鉴定

第五章南瓜木葡聚糖的提取优化

第六章南瓜糖肽和木葡聚糖的降血糖活性研究

第七章全文总结和讨论

参考文献

硕士期间发表文章

致谢