花生主要过敏原致敏机理及其脱敏方法的研究

摘要

我国是世界花生生产、消费和贸易大国，但是花生过敏却在威胁着人类的健康，因此识别鉴定中国主要花生致敏蛋白，研究过敏原致敏机理，探讨花生脱敏方法，不仅为花生过敏临床治疗和培育低过敏花生品种提供理论依据，而且具有重要的社会和经济意义。主要内容如下： 1．选用中国常用花生品种，用中国花生过敏患者血清识别中国主要花生致敏蛋白，用氨基酸测序法鉴定了过敏原的种类，结果表明：Ara h1，Ara h1的cDNA同系物一58kDa蛋白和Ara h3 为我国主要花生致敏蛋白。 2．比较了中国和美国常用花生品种致敏蛋白相对含量，发现除58kDa蛋白外，中国花生品种Ara h1和Ara h3的含量均低于美国花生品种，这可能是导致中国花生过敏发病率低于美国的主要原因。 3．研究了中国花生常用加工方式(油炸和水煮)和美国常用加工方式(烘烤)对花生致敏性的影响，较之烘烤方式，油炸和水煮加工方式并不一定能引起致敏蛋白含量的降低，不同缓冲溶液中致敏蛋白溶解度不同，由于未建立统一的花生致敏蛋白提取标准，缓冲溶液对过敏原提取率的影响不可忽略，因此基于本研究的结论加工方式并不是引起中国花生过敏发病率低于美国的主要原因。 4．用固相合成肽的方法合成Ara h1抗原决定簇肽段，用酶联免疫的方法识别了Ara h1显性作用表位，为第498-507位氨基酸序列的肽段，并用氨基酸“突变”的方法研究了影响Ara h1致敏性的关键氨基酸，即第499位和第503位的精氨酸和第502位的丙氨酸为降低．Ara h1致敏性的关键氨基酸。 5．选用不同来源的蛋白酶筛选降低烘烤花生致敏性的最佳用酶，结果表明，微生物来源的Alcalase碱性蛋白酶是降低烘烤花生致敏性的最佳用酶，动物来源的胃蛋白酶作用效果最不明显，植物来源的木瓜蛋白酶水解效率较差。 6． Alcalase蛋白酶降低花生致敏性的最佳条件是：温度55℃，pH8．0，底物浓度3％，酶用量(E：S)为30001I/g蛋白质，水解时间是6h。

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第一章绪论

1.1引言

1.2食物过敏概述

1.3国内外花生过敏研究进展

1.4存在的主要问题

1.5课题研究的主要内容及意义

第二章花生致敏蛋白的识别和鉴定

2.1引言

2.2实验材料与仪器

2.3实验方法

2.4结果与分析

2.5讨论

2.6本章小结

第三章Ara h1抗原决定簇的研究

3.1引言

3.2实验材料与仪器

3.3实验方法

3.4结果与讨论

3.5本章小结

第四章加工方式对花生致敏性的影响

4.1引言

4.2实验材料与仪器

4.3实验方法

4.4结果

4.5讨论

4.6本章小结

第五章降低烘烤花生致敏性的蛋白酶筛选研究

5.1引言

5.2实验材料与仪器

5.3实验方法

5.4结果

5.5讨论

5.6本章小结

第六章Alcalase水解花生蛋白降低致敏性最佳条件的研究

6.1引言

6.2实验材料与仪器

6.3实验方法

6.4结果与讨论

6.5本章小结

第七章结论与建议

7.1结论

7.2本研究的创新点

7.3建议与展望

参考文献

致谢

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