鸡传染性法氏囊病毒Harbin-1毒株A节段基因在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达

摘要

由传染性法氏囊病毒引起的传染性鸡传染性法氏囊病是影响养鸡业的重大疫病。病毒的不断变异和超强毒株的出现使得传统疫苗难以起作用。感染、亚临床感染造成的免疫抑制，给养鸡业带来巨大的经济损失。在分子水平上揭示病毒的致病机理及生产亚单位疫苗将有助于预防该病毒的传播与扩散。为此，本实验利用利用超强毒株Harbin-1和强毒株TS的A节段基因序列分别构建含不同的病毒基因组分的原核表达载体pET30agfpvp2、pET30agfpvp5、pET30agfpvp2-vp4-vp3，和酵母表达载体pPICvp2、pPKICvp2-vp4-vp3，以了解病毒基因表达特性和表达蛋白的功能。pET30agfpvp2、pET30agfpvp2-vp4-vp3表达产物多以包含体的形式存在。经SDS—PAGE考马斯亮蓝染色，荧光蛋白分析、western blot、 ELISA检测，确定所构建的5个载体都表达了目标蛋白。SDS-PAGE考马斯亮监染色，荧光蛋白分析、免疫印迹结果显示VP2的成熟过程是一个自我裂解过程，不需要VP4．的参与，在pVP2的羧基端的至少有5个裂解位点，氨基端也存在裂解位点，成熟的VP2相对分子量大小约3 4 kDa而不是报道的37-41 kDa；western blot的结果显示加工过程产生20kD肽也参与病毒粒子的组装。此外，初步证实了病毒的A节段基因的ORF2起始密码子区域可能是翻译调控区。 两种表达系统所得剑的表达产物均能与病毒的刚性血清特异反应，表明所得到的表达蛋白具有抗体的反应原性，是否具有免疫原性和诱导鸡体产生中和抗体有待进一步的研究。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要缩略词表

声明

第一章文献综述

第二章 原核表达载体的构建及表达研究分析

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3表达载体在原核中的表达

2.4实验结果

第三章IBDV酵母表达载体的构建及其表达分析

3.1材料

3.2方法

3.3实验结果与讨论

3.4计论

第四章结论与展望

参考文献

致 谢

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