林蛙油抗衰老活性成分的研究

摘要

为有效应用林蛙油的抗衰老活性，本论文用活性追踪的方法对林蛙油抗衰老活性成分进行研究。 首先优化了抗衰老活性测定的体外脂质过氧化．硫代巴比妥酸比色法，选用昆明白小鼠的5％肝匀浆和约3％的脑匀浆为生测材料。首次对影响MDA-TBA反应结果的NaCl浓度和有机试剂的添加进行研究，并讨论了有机试剂在反应体系对林蛙油活性成分所起的作用。得到结论：硫代巴比妥酸反应后生成MDA的量随体系中NaCl浓度增大而增大，乙醇、丙酮、乙腈在反应体系中的添加使MDA生成量增大，并不会对抗衰老成分灭活。 比较林蛙油样品、对照、空白参比的MDA-TBA反应产物溶液的光谱扫描结果，显示林蛙油参与反应后除在535nm有目标峰外，还产生非目标峰(450nm)。自行设计化学动力学反应装置，搭建设备进行实时光谱扫描监测，验证产生450nm峰的物质与MDA-TBA法测定林蛙油抗衰老物质活性的过程无关，确证了林蛙油的抗衰老活性和用MDA-TBA法测定林蛙油抗衰老活性的可行性。 分别用液氮研磨、室温干燥、烘干研磨、焖蒸、离心等方法处理林蛙油样品，初步得到抗衰老活性物质的性质：不受低温、研磨、离心分离的影响，高温下能够保持大部分活性。再分别用有机试剂(石油醚、丙酮)和水溶液(生理盐水、热水)提取活性成分，生测结果表明活性物质有水溶性强、热稳定性好、在截留分子量为8000情况下进行透析活性不损失的性质，推测大分子物质具活性。用酶解醇沉-Seveg法提取多糖，硫酸铵盐析得到蛋白。多糖粗提物具有活性，提取得到的纯的多糖和蛋白不能独立表达抗衰老活性。 测定样品中糖(葸酮-硫酸法)和蛋白质的含量(A<,280>法)。测得林蛙油中糖含量9.16％，蛋白质含量47.9％，各种提取样品中糖和蛋白的浓度与抗衰老活性无明显的相关性。通过电泳测样品中蛋白质的分子量。多糖粗提物中的蛋白大部分为林蛙油样品中蛋白质酶解后的残链，分子量约为6kD、21kD、37kD、56kD、83kD的蛋白质未彻底酶解。进行电泳后，有活性的提取物比硫酸铵盐析得到蛋白溶液明显多三组谱带，推测这几种蛋白质(分子量约为37.5kD，15.0kD，8.6kD)与活性有关。

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文摘

英文文摘

论文说明：符号及缩写

声明

第一章文献综述

第二章实验设计

2.1研究目的及意义

2.1.1研究目的

2.1.2研究意义

2.2采取的研究方法

2.1.1抗衰老生测方法的建立

2.1.2抗衰老活性成分的研究

第三章林蛙油抗衰老活性成分研究

3.1抗衰老活性离体测定方法

3.1.1仪器和实验材料

3.1.2生测方法的确立

3.1.3生测实验方法的优化

3.1.4结果与讨论

3.1.5结论

3.2验证MDA-TBA法对林蛙油抗衰老活性的测定

3.2.1仪器及实验材料

3.2.2抗衰老活性测定

3.2.3抗衰老活性测定结果

3.2.4结论

3.3林蛙油抗衰老活性成分的研究

3.3.1仪器与实验材料

3.3.2实验方法

3.3.3实验结果

3.3.4结论

第四章论文总结

参考文献

致谢

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