抑耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）芽孢杆菌的筛选及抑菌物质提取

摘要

本研究从256个人体头发样品中分离出芽孢杆菌359株。从实验室保藏的568株芽孢杆菌中，筛选出抑耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus，MRSA)的芽孢杆菌5株，使用杯碟法对这5株芽孢杆菌进行复筛，芽孢杆菌64-3抑MRSA效果较好。通过表形、全细胞蛋白电泳和16S rDNA序列测定的方法对其进行了分类鉴定，初步确定Bacillus sp．64-3为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，B．subtilis 64-3在Genbank的Accession Number为AccessionEF472462。 急性毒理学试验表明B．subtilis 64-3菌体及其发酵产物对人畜安全无毒，可以安全使用。耐酸性和耐胆盐性的测定表明，B．subtilis 64-3具有良好的耐酸和耐胆盐特性。同时，抑菌试验表明B．subtilis 64-3产生的抑菌物质对大肠杆菌、沙门氏菌和普通金黄色葡萄球菌均有抑制作用。 对B．subtilis 64-3产生抑菌物质的最佳培养基和培养条件进行了研究，确定B．subtilis 64-3产生抑菌物质的最佳培养基和培养条件为：蔗糖0.3％，蛋白胨1％，NaCl 0.5％、MgSO<,4>·7H<,2>O 0.7％、KH<,2>PO<,4> 0.7％，调节pH8.0，300mL，三角瓶装50mL液体培养基，种龄16h，接种量8％，培养温度37℃，140r/min摇床培养24h。 对B．subtilis 64-3产生的抑菌物质进行了提取。采用硫酸铵沉淀法和盐酸沉淀法不能有效提取该抑菌物质；有机溶剂法对提取该抑菌物质有比较明显的效果，其中甲醇的有机相抑菌效果最好。经HPLCC测定，B．subtillus 64-3粗提物在紫外吸收峰为370nm时，在41-42min和43-44min分别出现两个峰簇，推测B．subtillus 64-3产生的抑菌物质含有多个组分。 对5株MRSA的致泻能力进行了研究，发现不同菌株对小鼠的致泻能力相差很大，本试验中菌株MRSA1对小鼠的致泻效果最为明显。预防腹泻试验结果表明，B．subtilis 64-3发酵液对MRSA1引发的小鼠腹泻有良好的预防作用。

目录

文摘

英文文摘

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第一章文献综述

第二章芽孢杆菌的分离与抑耐甲氧西林金黄色葡萄球菌芽孢杆菌的筛选

2.1引言

2.2材料与方法

2.3结果与讨论

2.4结论

第三章芽孢杆菌64-3的菌株鉴定及菌种特性评价

3.1引言

3.2材料与方法

3.3结果与讨论

3.4结论

第四章Bacillus subtilis 64-3产抑菌物质的发酵条件优化

4.1引言

4.2材料与方法

4.3结果与讨论

4.4结论

第五章Bacillus subtilis 64-3抑菌物质提取

5.1引言

5.2材料与方法

5.3结果与讨论

5.4结论

第六章Bacillus subtilis 64-3对小鼠腹泻的预防研究

6.1引言

6.2材料与方法

6.3结果与讨论

6.4结论

第七章结论与建议

参考文献

附录

致谢

作者简历