当归补血汤含药血清对血管紧张素Ⅱ致肥大心肌细胞凋亡的影响

摘要

目的:通过观察当归补血汤含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)致肥大心肌细胞凋亡的影响,探讨当归补血汤对慢性心力衰竭的作用。
　　方法:测定经AngⅡ诱导后心肌细胞总蛋白含量以验证细胞肥大。实验分为空白对照组、AngⅡ(10-7 mol/L)组、AngⅡ+缬沙坦(10-6 mol/L)组、AngⅡ+含药血清(8.4g/kg)组。采用MTT法分别观察于0h、12h、24h、48h、72h、96h六个时点各处理措施对心肌细胞活性的影响,确定AngⅡ最佳作用时点;在此时点筛选当归补血汤含药血清的最佳浓度;应用Hoechst33342染色检测心肌细胞凋亡率;单细胞电泳技术检测各组心肌细胞DNA损伤情况;透射电镜观察各组心肌细胞线粒体超微结构的变化;Western Blotting测定各组心肌细胞凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl-2表达情况。
　　结果:
　　1.蛋白含量测定:与空白对照组相比,AngⅡ组的心肌细胞总蛋白含量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。
　　2.不同时点心肌细胞活性:在0h时点,各组之间细胞活性相比无统计学意义(P>0.05);在12h、24h时点,各组细胞活性均升高,AngⅡ组明显高与空白对照组、AngⅡ+缬沙坦组,差异有统计学意义(P<0.05);在48h时各组心肌细胞活性开始下降,且72h时AngⅡ组明显低于空白对照组、AngⅡ+缬沙坦组,差异有统计学意义(P<0.05);在以上6个时点,空白对照组与AngⅡ+缬沙坦组相比差异无统计学意义(P>0.05)。
　　3.当归补血汤含药血清最佳浓度:在48h时点, AngⅡ+40％含药血清组和AngⅡ+20%含药血清组细胞活性低于空白对照组和 AngⅡ组,差异有统计学意义(P<0.05);AngⅡ+10%含药血清组细胞活性明显低于AngⅡ组(P<0.05),与空白对照组相比无统计学意义(P>0.05);AngⅡ+5%含药血清组细胞活性明显高于空白对照组(P<0.05),与AngⅡ组相比无统计学意义(P>0.05)。
　　4.心肌细胞凋亡率:AngⅡ组心肌细胞凋亡率明显高升高,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05);AngⅡ+缬沙坦组、AngⅡ+10%含药血清组心肌细胞凋亡率与AngⅡ组相比明显降低,有显著性差异(P<0.05)。
　　5.单细胞电泳检测结果:AngⅡ组心肌细胞的头部DNA百分含量减少,尾部DNA百分含量、尾长、尾距增加,与空白对照组比较有显著差异(P<0.05);AngⅡ+含药血清组、AngⅡ+缬沙坦组彗星细胞头部DNA百分含量增加,尾部DNA百分含量、尾长、尾距均减少,与AngⅡ组相比差异显著(P<0.05)。
　　6.透射电镜观察结果:空白对照组心肌细胞线粒体外膜完整,峭清楚,排列整齐,线粒体基质致密,结构正常。而AngⅡ组线粒体排列紊乱,部分嵴变短甚至消失,出现空泡变化。AngⅡ+缬沙坦和AngⅡ+含药血清预处理组心肌细胞线粒体除有轻微肿胀,除基质密度变浅外,线粒体膜完整清晰与空白对照组无明显区别。
　　7. Western Blotting检测结果:与空白对照组相比AngⅡ组p53、Bax蛋白表达明显增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显减弱(P<0.05),Bcl-2/Bax的比值明显降低(P<0.05)。而AngⅡ+含药血清组心肌细胞p53、Bax蛋白表达显著减弱,Bcl-2蛋白表达显著增加, Bcl-2/Bax的比值显著升高,与AngⅡ组相比有显著差异(P<0.05)。
　　结论:当归补血汤含药血清对 AngⅡ致肥大心肌细胞凋亡有明显的抑制作用,机制可能与其能够减轻肥大心肌细胞DNA损伤,保护线粒体,调节p53、Bax和Bcl-2蛋白表达有关。

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前言

立 题 依 据

研 究 进 展

1 中医学对慢性心力衰竭的认识

2 现代医学对慢性心力衰竭的认识

3 慢性心力衰竭与心肌细胞凋亡

4 黄芪、当归及当归补血汤对心肌保护作用的研究

5 其他中药对心肌细胞凋亡的影响

6 结语与展望

实 验 研 究当归补血汤含药血清对血管紧张素Ⅱ致肥大心肌细胞凋亡的影响

1 技术路线图

2 实验材料

3 实验方法

4 结 果

5 讨 论

6 结论与展望

7 附 录

参考文献

致谢

附录一 动物实验设施使用证

附录二 实验动物质量合格证

附录三 中药鉴定证明书

附录四 中药鉴定证明书