牛朊蛋白的多克隆抗体制备及其在脑组织中分布的检测

摘要

目的本研究拟以原核表达的GST-BoPrP(23~242)融合蛋白为抗原,免疫清洁级BALB/c小鼠,制备抗牦牛朊蛋白的特异性抗血清,验证GST-BoPrP(23~242)融合蛋白的反应性和免疫原性;以牛脑组织材料制成冰冻切片,以自制抗血清为一抗,对牛脑组织中分布的PrP进行检测,进而为疯牛病的检测和重组成熟BoPrP(23~242)单克隆抗体的制备提供技术方法和实验材料.结果PCR扩增和双酶切鉴定发现,在琼脂糖凝胶中出现了一条与预期大小相符的约为660 bp条带.脑组织冰冻切片经ABC法染色后,400×镜下观察到:未经蛋白酶K处理的组织切片上出现了棕褐色颗粒,染色结果为阳性,经蛋白酶K处理的切片未出现棕褐色颗粒,染色结果为阴性,且染色效果与标准单抗4C11相同.

目录

文摘

英文文摘

第一篇文献综述朊蛋白与朊粒病的研究进展

摘要

0前言

1朊蛋白概述

1.1朊蛋白的发现

1.2朊粒病病理变化和临床表现

1.3朊粒病的发病机制

2朊粒病的诊断及预防和治疗

2.1朊粒病的诊断

2.2预防和治疗

3朊蛋白的功能及其变构论

3.1朊蛋白的功能

3.2朊蛋白的变构机制

4朊蛋白的生物学特征

5存在的问题和展望

第二篇研究报告牛朊蛋白的多克隆抗体制备及其在脑组织中分布的检测

1前言

2材料和方法

2.1材料

2.2方法

3结果与分析

3.1重组质粒的鉴定

3.2表达产物的鉴定

3.3重组朊蛋白提纯和复性效果

3.4抗血清的鉴定

3.5脑组织中朊蛋白的分布

4讨论

4.1牦牛朊蛋白抗血清制备和鉴定

4.2牛脑组织中朊蛋白的检测与分布

致谢

参考文献

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