多重PCR检测猪伪狂犬、细小病毒和猪圆环病毒2型方法的建立和应用

摘要

1．以猪伪狂犬病毒（PRV）的基因组序列作为参考，设计了应用在同一个PCR反应体系的3对特异性扩增引物，建立了鉴别诊断PRV疫苗株和流行毒株的多重PCR方法（Multiplex PCR，Multi-PCR）。在相同的PCR扩增条件下，以PRVDNA作为模版，同时加入3对特异性引物，可同时扩增不同长度的PRVgB，gE和Tk基因序片段，其大小分别为427bp（gB），298bp（gE）和208bp（Tk）。利用建立的Multi-PCR方法，对商品化的四种不同基因缺失的PRV疫苗进行检测，其扩增结果与疫苗的基因缺失背景一致。试验结果表明，Multi-PCR可同时区分PRV流行毒株和疫苗毒株，且具有良好的敏感性和特异性。该方法可应用在PRV临床诊断和流行病学调查研究工作中。 2．根据GenBank上猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪细小病毒（PPV）的已发表序列分别设计并合成4对特异性扩增引物建立PRV，PCV2，PPV单项PCR检测方法。分别扩增出预期的657bp（PPV），490bp（PCV2），372bp（PRV-gB）和298bp（PRV-gE）片段，在优化单项PCR反应条件基础上建立了PRV-PCV2-PPV复合PCR检测方法，为预防和控制上述3种病毒性传染病提供了一种快速、敏感、特异的检测方法。 3．为促进PCR反应中猪伪狂犬病毒gB基因的扩增效率，研制了含有二甲基亚砜（DMSO）成份的针对gB基因的PCR缓冲液。结果表明：在DMSO作用下，增强了gB基因扩增特异性，4%～10%的DMSO可以获得最佳扩增效果。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略表

声明

第一部分 文献综述

第一章 猪伪狂犬病毒研究进展

1.猪伪狂犬病概述

2.PR国内外流行动态

3.PRV病原学及分子生物学

4.PRV病毒检测

5.伪狂犬病毒疫苗

第二章 猪细小病毒研究进展

1.猪细小病毒病的概述

2.PPV国内外流行动态

3.病原学及分子生物学

4.PPV诊断方法

第三章 猪圆环病毒研究进展

1.猪圆环病毒感染的概述

2.PCV国内外流行动态

3.病原学及分子生物学

4.猪圆环病毒的诊断

5.多重PCR技术

第二部分 研究报告

第一章 建立三重PCR方法快速鉴别猪伪狂犬疫苗毒和野毒

1材料与方法

2结果

3讨论

第二章 检测猪细小病毒(PPV)、圆环病毒2型(PCV2)及猪伪狂犬病毒(PRV)疫苗毒和野毒的复合式PCR方法的建立

1材料与方法

2结果

3讨论

第三章 DMSO对高GC含量PRV gB基因PCR扩增影响

1材料与方法

2.结果

3讨论

第四章 结论

参考文献

致谢

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