高致病性禽流感病毒A/Duck/Guangxi/53/02株感染性克隆构建及分子演化研究

摘要

禽流感(AvianInfluenza，AI)是由A型流感病毒引起的禽类感染的高度接触性传染病。97年香港H5N1亚型禽流感致人死亡事件使人们认识到禽流感病毒不仅可以直接由禽感染人，而且还能致人死亡。2004年起，H5N1亚型高致病性禽流感在许多东南亚国家发生了流行，禽流感感染人的事件和死亡人数也在逐渐增加。这说明H5N1亚型高致病性禽流感不仅对养禽业造成巨大危害，更重要的是对人类健康构成巨大潜在威胁。因此对高致病性禽流感病毒的生物学特性的研究对于了解禽流感病毒的遗传变异情况及禽流感病毒结构和功能的关系奠定了基础。 A/Duck/Guangxi/53/02是从我国南方健康鸭体内分离到的H5N1亚型高致病性禽流感病毒，对A/Duck/Guangxi/53/02进行全基因序列分析发现，HA裂解位点为6个连续的碱性氨基酸RRRKKR，具有高致病性禽流感的特征。在26、27、39、170、181、302、500、559有糖基化位点。HA226和228位分别为Gln和Gly，符合禽源流感病毒的特征。 NA颈部49-68位19个核苷酸缺失，在50、58、63、68、88、146、235、386位有糖基化位点。NS基因有15个核苷酸缺失。PB2基因627位为E(Glu)，701位为D(Asp)， DKGX/53/02与HK/483/97除HA基因外，其余基因同源性都比较低，在进化树上位于不同的分支上，说明有着不同的起源。 DKGX/53/02与GSGD/1/96的HA、NA、PB1、NP、M的同源性大于97﹪，与DKGJ/13/02、DKSH/35/02各基因片段同源性大于90﹪，有些基因片段的同源性大于95﹪。这几株病毒对鸡都具有高致病性，但对小鼠的致病性表现出明显的差异。 本研究建立了对A/Duck/Guangxi/53/02(DKGX/53/02)的8质粒反向遗传操作系统，并通过细胞转染成功拯救了该病毒(R-DKGX/53/02)。R-DKGX/53/02在对Balb/c小鼠的致病性方面保持了与亲本野生毒(W-DKGX/53/02)一致的生物学特性，R-DKGX/53/02和W-DKGX/53/02106EID50鼻腔感染小鼠后第三天都只能在肺脏检测到病毒，病毒含量分别为3.22±0.51和3.69±0.88。A/Duck/Guangxi/53/02反向遗传操作系统的成功建立为研究中国高致病性禽流感病毒分离株的生物学特性、禽流感病毒感染哺乳动物的分子机制及致病性差异奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

第一章禽流感反向遗传学研究进展

第二章高致病性禽流感病毒A/Duck/Guangxi/53/02分子演化分析

第三章A/Duck/Guangxi/53/02禽流感病毒感染性克隆质粒构建及重组病毒的救获

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