鸡传染性法氏囊病病毒Gt株感染性分子克隆的构建

摘要

[目的]建立高效鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)拯救平台,为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础.[方法]在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签(A节段:EcoR V酶切位点;B节段:PstI酶切位点).在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz).将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的a肌动蛋白启动子下游,构建IBDV感染性克隆pCAGGmGtAHRT和pCAGGmGtBHRT,LipofectamineTM2000介导共转染DFI细胞,进行病毒拯救研究. [结果] 构建的IBDV感染性克隆可在DFI、Vero/E6、Vero/P12等3种细胞上高效拯救出病毒.RT-PCR、间接免疫荧光、电镜等均检测到了拯救的IBDV,且存在分子标签.拯救毒在CEF上能产生特有的砂砾状CPE,且TCID50与亲本毒差异不显著,具有相似的生物学特征.[结论]构建的RNA聚合酶ⅢBDV拯救系统高效、稳定、简便、经济,且具有良好的细胞普适性.