针刺长强穴对自闭症大鼠海马NLGN--3蛋白表达的影响

摘要

目的:观察针刺长强穴对自闭症大鼠海马NLGN-3蛋白表达的影响。 方法:(1)选取清洁级Wistar雄性及雌性大鼠各10只。采用Wistar大鼠，在妊娠第12.5天时，腹腔注射VPA制作子代autism大鼠模型。VPA模型组24只，空白对照组(A组)8只。两组幼鼠的发育情况进行体重测定和方向趋向性机能检测，行为学进行伤害知觉测试;将VPA组中的24只幼鼠通过随机数字表法分为模型对照组（B组）8只，长强治疗组（C组）8只，非穴治疗组（D组）8只。(2)C组和D组在幼鼠断乳后次日进行针刺治疗，C组选取长强穴，D组选取非穴。针刺穴位深度约0.3寸，进针后行平补平泻提插手法，频率约为160-200次/分钟，持续一分钟。每日针刺1次，10天为一个疗程，一个疗程结束后休息2天再针刺，连续针刺3个疗程。正常对照组（A组）与模型对照组（B组）仅模拟针刺组抓取动作，余同前。干预疗程结束后次日，各组实验大鼠进行水迷宫测试，并在水迷宫测试后第二天取脑，通过免疫组织化学技术检测脑组织海马NLGN-3阳性细胞灰度值。实验数据采用单因素方差分析及相关性分析。 结果:(1)子代幼鼠发育情况测定:①体重测定:空白对照组PN7(14.21±1.85)、VPA模型组PN7(13.98±1.83)，空白对照组PN14(25.34±2.80)、VPA模型组PN14(25.64±2.41)，空白对照组PN21(37.4PN21(37.4±3.28)，VPA模型组(36.62±3.61).PN7p=0.489＞0.05; PN14p=0.895＞0.05; PN21p=0.371＞0.05均无统计学意义;②方向趋向性测试:空白对照组PN7(152.34±47.54)、VPA模型组PN7(228.50±98.42);空白对照组PN8(130.81±42.60)、VPA模型组PN8(192.46±76.42);空白对照组PN9(78.16±38.25)、VPA模型组PN9(139.07±79.61);空白对照组PN10(55.04±31.57)、VPA模型组PN10(108.68±94.72).PN7p=0.001＜0.0; PN8p=0.0500＜0.05; PN9p=0.000＜0.05;PN10p=0.000＜0.05均有显著差异，空白对照组各时间段方向趋向性均优于VPA模型组。(2)伤害知觉测试:在PN9(p=0.010＜0.05)、PN11(p=0.003＜0.05)、PN13(p=0.000＜0.05)及PN15(p=0.269＞0.05)时，VPA模型组痛阈高于空白组，且在PN9、PN11、PN13时有显著性差异。在PN15时两组差异无统计学意义。(3)水迷宫测试:①针刺干预后平均逃避潜伏期分别为A组(13.64±1.72)、B组(30.32±8.32)、C组(14.56±3.05)、D组(26.78±5.34)。A、C组平均潜伏时期明显短于B组(P＜0.05)，有统计学意义;②针刺干预后水迷宫第五天穿越平台次数分别为:A组(2.25±0.46)、B组(0.87±0.64)、C组(1.87±0.64)、D组(0.87±0.35)。A、C组穿越平台次数明显多于B组(P＜0.05)，有统计学意义。(2)海马NLGN-3蛋白阳性细胞灰度值检测结果:A组(137.76±6.65)、B组(189.14±8.59)、C组(175.05±6.71)、D组(187.67±8.66)。A、D组明显少于C组(P＜0.05)。(3)针刺干预后长强组实验数据相关性分析:①平均逃避潜伏期与海马NLGN-3阳性细胞灰度值正相关(r=0.928，P＜0.05);②穿越平台次数与NLGN-3阳性细胞灰度值负相关(r=-0.838，P＜0.05)。 结论:(1)针刺长强穴可提高VPA大鼠学习记忆能力。(2)针刺长强穴可使VPA大鼠海马NLGN-3蛋白的表达上调。(3)针刺长强穴改善VPA大鼠学习记忆能力与增强海马NLGN-3蛋白表达成正相关

目录

声明

摘要

前言

第一章 实验方法

1 实验材料

1．1 实验动物

1．2 实验试剂

1．3 实验设备

2 实验方法

2．1 动物模型制备及实验动物分组

2．2 子代鼠发育情况检测

2．3 伤害性知觉测试—热板致痛法

2．4 针刺干预

2．5 Morris水迷宫学习记忆测试实验

2．6 灌注取脑

2．7 样品制备及免疫组织化学检测

2．8 统计分析方法

2．9 实验线路图

第二章 结果

1 空白对照组与VPA自闭症模型组实验鼠发育情况比较

1．1 体重测定结果

1．2 方向趋向性机能评估

2 大鼠伤害性知觉测试—热板致痛法

3 Morris水迷宫实验结果

3．1 定位航行实验结果

3．2 空间探索实验结果

4 海马NLGN-3检测结果

5 针刺干预后长强组海马NLGN-3阳性细胞灰度值与平均逃避潜伏期及穿越平台次数相关性分析

第三章 讨论

1 课题设计分析

1．1 实验动物模型的选择

1．2 观察指标的选择

1．3 长强穴的选择

2 实验结果分析

2．1 子代幼鼠发育情况分析

2．2 子代幼鼠伤害性知觉测试—热板致痛法结果分析

2．3 水迷宫定位划行实验结果分析

2．4 水迷宫空间探索实验结果分析

2．5 海马NLGN-3阳性细胞免疫组化检测结果分析

2．6 针刺干预后长强组观察指标相关性分析

3 机制探讨

3．1 海马NLGN-3蛋白参与调节学习和记忆能力

3．2 针刺刺激可通过“外周神经-脊髓-中枢”途径启动机体内源性保护机制

4 不足与展望

结论

参考文献

附录

致谢

文献综述 针刺治疗儿童自闭症的临床研究进展

作者简历