针刺“长强”穴对自闭症模型大鼠海马区NF-κB、Bcl-xL蛋白表达的影响

摘要

目的：
　　观察针刺“长强”穴对自闭症模型大鼠海马区NF-κB、Bcl-xL蛋白表达的影响。
　　方法：
　　(1)采用SPF级健康成年Wistar大鼠以雌雄1∶1合笼，于次日上午检查大鼠托盘，若于托盘中发现阴栓，则记为胚胎第0.5天将孕鼠分笼饲养;(2)将孕鼠按随机数字表法分为两组，一组孕鼠于胚胎12.5天腹腔注射丙戊酸钠(valproic acid，VPA)制作子代自闭症模型大鼠;另一组孕鼠于胚胎12.5天腹腔注射生理盐水，产下的仔鼠为空白组;(3)产下的仔鼠进行发育情况、强迫游泳、热板致痛以及旷场行为学检测，筛选出符合自闭症模型的仔鼠;(4)从模型组中随机选出24只模型组仔鼠，随机分成模型组、非穴组、长强穴，每组各八只;从空白组中随机选出8只仔鼠为空白组，长强组取长强穴，即肛门与尾根之间的凹陷位置，于仔鼠24日龄开始干预治疗，直刺，进针深度约0.3-0.4寸，采用平补平泻，行提插法，频率160-200次/min，持续行针1min。非经非穴组操作同长强组;模型组、空白组在相同环境下饲养，模拟抓握，不予针刺;(5)所有分组于干预前（23日龄）及干预后（34日龄）行旷场行为学检测，34日龄取大鼠大脑海马区组织，采用免疫印迹法检验NF-κB、Bcl-xL蛋白在海马区的表达。(6)所有数据由SPSS20.0软件分析处理。
　　结果：
　　1、体重指标检测：与空白组相比，模型组体重在PN7无明显差异（P＞0.05），在PN14、PN21、PN35有显著性差异(P＜0.05)，提示自闭症模型鼠体重增长慢。
　　2、睁眼实验：与空白组相比，模型组睁眼时间在PN13、PN17无显著性差异(P0.05)，出生后PN14、PN15、PN16均有显著性统计学差异（P＜0.05），说明自闭症模型大鼠睁眼较迟。
　　3、强迫游泳实验：与空白组相比，模型大鼠的游泳能力明显低下，在PN9、PN11、PN13、PN15等各个年龄段的对比，均有显著性差异(P＜0.05)。
　　4、热板致痛实验：与空白组相比，模型仔鼠痛觉明显迟钝。两组间在PN9、PN11、PN13、PN15不同年龄段的致痛时间均有显著性差异(P＜0.05)，具有统计学意义。
　　5、旷场行为学：1）干预前：与空白组比较，模型组、长强组、非穴组的总路程更短、平均速度更慢、周边区域活动时间更长、重复刻板动作更多，空白组与其余三组的总路程、平均速度、周边区域活动时间、重复刻板动作对比均有显著性差异，具有统计学意义(P＜0.05);2）干预后：长强组的总路程较前明显增长、平均速度加快、周边区域活动时间减短、重复刻板动作减少，与空白组比较，两组的总路程、平均速度、周边区域活动时间、重复刻板动作差异无统计学意义(P＞0.05);与模型组和非穴组比较，其总路程、平均速度、周边区域活动时间、重复刻板动作均有显著性差异，有统计学意义（P＜0.05）。
　　6、免疫印迹：与空白组比较，模型组和非穴组大鼠大脑海马区的NF-κB、Bcl-xL的蛋白表达水平明显上调，具有统计学差异(P＜0.05);长强组大鼠大脑海马区的NF-κB、Bcl-xL蛋白表达量差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论：
　　1.针刺“长强”穴可改善自闭症大鼠异常行为模式。
　　2.自闭症模型大鼠海马区NF-κB、Bcl-xL蛋白的表达较空白组上调。
　　3.针刺“长强”穴可下调VPA自闭症模型大鼠海马区NF-κB、Bcl-xL蛋白的表达有关。

目录

声明

摘要

引言

材料与方法

1 材料

1．1 动物

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器和设备

2 方法

2．1 自闭症模型大鼠的建立

2．2 实验动物分组

2．3 仔鼠发育行为学检测

2．4 旷场行为学检测

2．5 干预

2．6 免疫印迹法检测NF-κB、Bcl-xL蛋白的表达

3 统计学方法

4 技术路线图

结果

1 仔鼠发育情况检测结果

1．1 仔鼠体重指标检测

1．2 仔鼠睁眼时间评估

2 行为学检测结果

2．1 强迫游泳实验

2．2 伤害性知觉测试—热板致痛实验

3 旷场行为学检测结果

3．1 自发活动—总路程和平均速度

3．2 趋避性—周边区域活动时间

3．3 重复刻板动作

4 免疫印迹检测海马区相关蛋白结果

4．2 Bcl-xL蛋白表达检测结果—蛋白印迹法

讨论

1 祖国医学对自闭症的认识和治疗

1．2 祖国医学对自闭症的治疗

2 现代医学对自闭症的认识及治疗

2．1 现代医学中自闭症的发病机制

2．2 现代医学中自闭症的治疗进展

3 自闭症模型的重复建立及行为学影响

3．1 自闭症模型大鼠的建立

3．2 自闭症模型大鼠的行为学分析

4 旷场行为学检测

5 祖国医学对“长强”穴治疗自闭症的理论基础

5．1 长强穴概述

5．2 长强穴的临床应用

5．3 长强穴治疗自闭症的基础研究

6．1 细胞凋亡过程中NF-κB、Bcl-xL蛋白表达及作用

6．2 NF-κB、Bcl-xL蛋白结果分析

7 不足与展望

结论

参考文献

附录

文献综述 针刺治疗自闭症的机制探讨

致谢

作者简历