四妙散对尿酸诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)TGF-β1、α-SMA及E-Cadherin表达的影响

摘要

目的:采用四妙散含药血清干预尿酸诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化的模型，初步探讨四妙散抗肾间质纤维化的机理。
　　方法:1.采用不同浓度尿酸溶液刺激人肾小管上皮细胞，观察形态学的改变，MTT检测尿酸对细胞活力的影响，RT-PCR检测细胞α-SMA，E-Cadherin mRNA的表达，制备肾间质纤维化的模型。
　　2.四妙散含药血清干预尿酸诱导的肾间质纤维化的模型，观察其对尿酸诱导的HK-2细胞形态影响，MTT法测定各组细胞增殖活力，RT-PCR检测各组细胞TGF-β1，α-SMA，E-Cadherin mRNA的表达，免疫组化法检测各组细胞TGF-β1，α-SMA，E-Cadherin蛋白的表达。
　　结果:1.形态学结果显示:正常组的人肾小管上皮细胞(HK-2)细胞呈现铺路石状，排列规整。模型组细胞数目的明显减少，细胞形态拉长，变为梭形。MTT结果显示24h的0.225mg/ml尿酸溶液能显著抑制人肾小管上皮细胞(HK-2)的活性(P＜0.01)。RT-PCR显示，与正常组相比，模型组的α-SMAmRNA的表达升高，尤以24h的0.225mg/ml尿酸刺激组的升高显著(P＜0.01)。而模型组的E-Cadherin mRNA的表达下降，尤以24h的0.225mg/ml尿酸刺激组的下降显著(P＜0.01)。
　　2.在加入四妙散含药血清干预后，随着药物浓度增加，贴壁细胞数目增加，形态逐渐由梭形变成铺路石样。MTT结果显示:四妙散含药血清能明显促进尿酸诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)细胞的活性，且呈现时间和剂量的依赖性，其中以24h高剂量的升高最为明显(P＜0.01)。RT-PCR的结果显示:在加入含药血清干预24h后，α-SMA mRNA和TGF-β1 mRNA的表达下降，尤以高剂量组下降显著(P＜0.01)。而四妙散干预的E-Cadherin mRNA表达升高，而E-Cadherin mRNA表达升高，尤以高剂量组升高显著(P＜0.01)，和模型组相比，具有显著性差异(P＜0.05）。免疫组化显示，α-SMA及TGF-β1蛋白的表达在正常组可见少量浅黄色阳性表达;模型组棕黄色阳性面积增多，部分区域呈深棕色，阳性表达强烈，其阳性目标总面积和IOD值明显升高，与正常组相比具有显著差异性(P＜0.01);在加入四妙散低、中、高剂量组，随着剂量的增加阳性表达面积明显减少，颜色变浅，四妙散含药血清低、中、高剂量组TGFβ-β1阳性目标总面积和IOD值较模型组低(P＜0.05)，而高剂量组TGF-β1阳性目标总面积和IOD明显降低，具有显著性差异(P＜0.01)。生理盐水组与模型组相比变化不大。E-Cadherin的蛋白的表达在正常组可见棕黄色阳性表达;模型组黄色阳性面积减少，棕黄色变浅，其阳性目标总面积和IOD值明显降低，与正常组相比具有显著差异性(P＜0.01);在加入四妙散的低、中、高剂量组，随着剂量的增加阳性表达面积增加，颜色逐渐变深，四妙散含药血清低、中、高剂量组E-Cadherin阳性目标总面积和IOD值较模型组升高(P＜0.05)，而高剂量组E-Cadherin阳性目标总面积和IOD明显升高，具有显著差异性(P＜0.01)。生理盐水组与模型组相比，变化不大。
　　结论:1.采用0.225mg/ml尿酸溶液刺激人肾小管上皮细胞(HK-2)24h，可以建立肾间质纤维化的细胞模型。
　　2.四妙散含药血清能明显改善尿酸诱导的HK-2细胞形态学改变，预防肾间质纤维化的发生。
　　3.四妙散下调尿酸诱导的纤维化模型的TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白的表达，上调E-Cadherin mRNA和蛋白的表达，可能是其预防肾间质纤维化的机制之一。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

实验结果

1．尿酸诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)纤维化模型的建立

2．四妙散含药血清对尿酸诱导HK-2细胞的影响

讨论

1．高尿酸血症与肾间质纤维化

2．尿酸诱导的肾间质纤维化的模型

3．肾间质纤维化的中西医治疗情况

4．四妙散含药血清对尿酸诱导的人肾小管上皮细胞的影响

5．存在问题及展望

结论

参考文献

致谢

文献综述

作者简历