雷公藤低毒高效部位及其β-环糊精包合物的制备

摘要

雷公藤临床主要用于治疗类风湿性关节炎、肾小球肾炎、肾病综合征、红斑狼疮等疾病，疗效确切。但其不良反应不容忽视。雷公藤的不良反应发生的主要原因有雷公藤化学成分复杂且其药效、毒性物质基础尚不明确，缺乏科学、有效的质量评价和控制方法，提取纯化工艺多样，导致不同厂家生产的雷公藤制剂疗效及毒副作用差异大，临床上缺乏使用指南。雷公藤中有效成分大多难溶于水，在很大程度上降低了雷公藤制剂的生物利用度。
　　本课题在课题组前期研究基础上优化HPLC色谱条件，建立了8批不同产地雷公藤药材的指纹图谱，得到35个共有峰。进行了HPLC-MS分析，对指纹图谱中各色谱峰进行鉴定，利用对照品以及文献比对，35个特征峰中鉴定了19个化学成分，其中二萜类成分7个，三萜类成分6个，生物碱类成分5个。结合药理学实验结果，采用偏最小二乘分析法构建了谱效关系。
　　以谱效分析的结果为指导，按照保留“主要药效成分”、控制“药效兼毒性成分”、除去“主要毒性成分”，利用大孔树脂或硅胶色谱法，制备不同成分比例的组分，然后进行HPLC分析，通过与谱效结果比对初步筛选出符合低毒高效要求的组分，最后进行药效和毒性验证对这些组分筛选并进行药效、安全性验证，筛选出低毒高效提取物组分T3-3组分，T3-3的制备工艺为:取粗浸膏适量，加入适量甲醇溶解，按1∶1加入硅胶（100～200目）拌样，用10倍量硅胶（100～200目）装柱，用二氯甲烷-甲醇(80∶1)展开剂洗脱（10倍柱床体积），收集洗脱液，减压浓缩回收有机试剂，得浸膏，真空干燥，即得。
　　将得到的雷公藤低毒高效提取物用β-环糊精进行包合，对包合物的制备方法、包合物的投料比、包合时间、以及加水量进行了单因素考察。初步确定了雷公藤低毒高效包合物的制备工艺为确以研磨法，加水量2倍（纯化水:β-环糊精=2∶1）投料比（β-环糊精:雷公藤低毒高效提取物）为10∶1研磨1h后即得。选用SEM法、X射线衍射法、DSC法对雷公藤低毒高效包合物进行物相鉴定，验证了包合物的形成。同时测定了包合物的平衡溶解度，结果表明将雷公藤提取物制成包合物后，其有效成分的的溶解度均显著提高，在蒸馏水中:雷公藤甲素的溶解度提高约3倍，雷公藤内酯酮的溶解度提高约46倍，雷公藤红素的溶解度提高约3倍，雷公藤内酯甲的溶解度提高约2倍，雷酚内酯，雷公次碱的溶解度均显著提高。测定了包合物的溶出度，与雷公藤提取物相比，将雷公藤提取物制成包合物后，提取物各有效成分的溶解度显著提高。

目录

声明

摘要

前言

第一章 雷公藤指纹图谱的建立及质谱分析

1 仪器与试药

1．1 仪器

1．2 药物与试剂

2 方法与结果

2．1 样品溶液制备

2．2 色谱条件的确定

2．3 雷公藤HPLC指纹图谱的建立

2．4 雷公藤HPLC指纹图谱解析

2．5 方法学考察

3 质谱分析

3．1 质谱条件

3．2 数据处理

3．3 构建雷公藤化学成分数据库

3．4 质谱分析及成分鉴定

4 讨论

5 结论

第二章 雷公藤低毒高效部位的制备

1．1 仪器

1．2 药品与试剂

2 雷公藤低毒高效部位的制备工艺

2．1 雷公藤提取及纯化方案

3 低毒高效部位筛选及药效、安全性验证

3．1 各纯化组分对RAW264．7 细胞增殖活性的影响

3．2 各纯化组分的免疫抑制活性结果

3．3 各纯化组分对心、肝、肾的毒性作用

4 工艺验证

5 讨论

6 小结

第三章 雷公藤低毒高效包合物的制备

1 仪器与材料

1．1 仪器

1．2 药品与试剂

2 方法与结果

2．1 含量测定方法

3 雷公藤低毒高效提取物包合物的制备

3．1 包合方法的选择

3．2 投料比对包合物的影响

3．3 包合时间对包合物的影响

3．4 加水倍数对包合物的影响

3．5 验证试验

4 雷公藤低毒高效包合物的物相鉴定

4．1 扫描电镜法(SEM)

4．2 差示扫描量热法(DSC)

4．3 红外光谱分析(IR)

4．4 X-射线衍射法(XRD)

5 雷公藤低毒高效包合物的理化性质考察

5．1 溶解度测定

5．2 溶出度测定

6 讨论

7 结论

结论

参考文献

文献综述 难溶性药物增溶技术研究进展

致谢

作者简历