大肠杆菌0157：H7单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

摘要

用E.coli O157：H7菌体免疫BALB/c鼠,，制备免疫脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞融合，获得了16株分泌单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。其中，1D3、2E7和2H7三株为0157：H7特异单克隆抗体，Ig亚类分别为IgMK、IgG2bK和IgG2bK，腹水抗体ELISA效价分别为103、105和106。用胶体金标记纯化的单克隆抗体2E7，制备金标抗体玻璃纤维素膜；将纯化的2H7和羊抗鼠IgG分别作为检测和对照捕捉抗体包被于硝酸纤维素膜(NC)上；组装成双抗夹心法0157：H7胶体金免疫层析检测试纸条。用该试纸条可特异检测0157：H7，敏感度为106cFU/ml，与相同单克隆抗体2H7和2E7建立的0157：H7夹心ELISA检测方法的敏感度相当，试纸条简便快速，在1-5min内可得出检测结果，便于0157：H7的临床快速诊断与现场检测样品的快速筛查。