巢式RT-PCR技术检测绵羊肺腺瘤病毒

摘要

为了准确检测绵羊肺腺瘤病(sheep puimonary adenomatosisSPA)的病原，本试验通过外源性绵羊肺腺瘤病毒的囊膜基因env的TM区和长末端重复序列LTR的U3区分别设计特异性的内外侧引物，运用巢式RT-PCR的方法进行检测，同时与普通RT-PCR进行比较。结果表明，测得的绵羊肺腺瘤病毒的env基因和U3区序列与GenBank中发表的外源性绵羊肺腺瘤病毒基因序列(AF105220)同源性分别为100％和98％。特异性试验结果表明本试验设计的env基因和LTR的U3区的内外侧引物不能从健康绵羊、小鼠、家兔的肺组织以及感染了SPA羊的肾、肝、脾的RNA中扩增出条带。敏感性试验结果表明，env基因和LTR的U3区的巢式RT-PCR诊断方法最低能检测出的标准模板RNA量分别为48fg和48pg，而普通的RT-PCR，env基因及LTR的U3区的最低检出量分别为0.48ng和4.8ng，得出巢式RT-PCR的敏感性高于普通RT-PCR，同时env基因的敏感性高于LTR的U3区的敏感性。以上试验说明巢式RT-PCR技术对于检测绵羊肺腺瘤病具有很高的敏感性和实用性。