鹅副黏病毒病NP、L基因RNA的体外转录合成及其靶脱氧核酶的初步筛选

摘要

目的：为探讨脱氧核酶在抑制GPMV复制研究，利用体外转录方法制备鹅副黏病毒病NP、L基因RNA并用该RNA对其所设计靶脱氧核酶进行初步筛选。方法：通过RT-PCR方法获得目的基因NP、L，同时针对NP、L基因保守区上游设计T7启动子序列及酶切位点，从而获得带有T7启动子序列的NP、L基因保守区，并将其连接到PUM-T simple克隆载体上，经HindⅢ和Barry H Ⅰ双酶切反应、菌落PCR、以及基因测序鉴定重组质粒。重组质粒T7-NP及T7-L经HindⅢ线性化后作为体外转录反应的模板。结果：经测序鉴定，正确地构建含T7启动子的NP及L基因的重组质粒，按RiboMAXTM T7 Express System体外转录试剂盒说明将线性重组质粒转录出高纯度的GPS基因RNA。结论：为进一步研究脱氧核酶在细胞水平、体内水平剪切NP、L基因mRNA，抑制鹅副黏病毒NP、L基因的蛋白表达奠定了基础，并有望应用于抗病毒药物开发和转基因动物研究。