牛传染性鼻气管炎病gB蛋白的截短表达及间接ELISA方法的建立

摘要

为建立一种检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的间接ELISA方法,本研究根据GenBank发表的IBRV全基因组序列,利用软件DNAStar对糖蛋白B(gB)的氨基酸序列进行亲水性和抗原性分析.同时结合已发表的gB信息,设计引物扩增gB开放阅读框第190～524氨基酸残基(aa)的基因,PCR产物插入pET-30a并成功构建重组质粒pET-30a-gB.SDS-PAGE结果显示目的蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,大小约为41.4ku.Western-Blot鉴定表明目的蛋白具有良好的反应原性.以纯化的gB蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA检测,该方法敏感性好,特异性强,与其他病原血清无交叉反应,其组内组间变异系数均低于11％.与IDEXX公司的gB-ELISA试剂盒进行对比,阳性符合率为84.28％,阴性符合率为85.71％.对黑龙江省10农场的血清样品进行了IBR的流行性调查,阳性率最高为65.52％,最低为5.56％,平均阳性率为18.01％.本研究建立的ELISA方法有望商品化并为进出口检疫和疾病防制工作提供参考.