猪繁殖与呼吸综合征病毒基因重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的建立

摘要

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7的核苷酸序列设计特异性引物，经RT-PCR扩增，扩增出大小为105 bp的部分基因片段。用T4连接酶将目的片段与pMD-18T载体连接，并转化到大肠杆菌DH5 α感受态细胞中。测序鉴定后，将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板，通过实时荧光定量PCR方法，建立了PRRSV的标准曲线及其直线回归方程。该方法具有线性关系好、特异性强、敏感性高、重复性好等特点，为分析PRRSV感染猪体内病毒的绝对含量提供了必要的技术平台。