树鼩载脂蛋白AV系列突变体的细胞内定位分析

摘要

目的：研究不易感动脉粥样硬化动物-树鼩载脂蛋白AV基因不同结构域对细胞内定位的影响.方法：前期实验室利用快速扩增cDNA末端技术成功获得了该基因的cDNA全长,该基因有两个转录本,分别为1948bp和1937bp,在GenBank中的注册号分别为HQ913636.1和HQ913637.1.结果：成功构建了树韵载脂蛋白AV系列表达载体，pDsRed-WT(野生型)，pDsRed-FN(N端)，pDsRed-CR(C端)，并突变了187位氨基酸(Gly→Cys)229位氨基酸(Cys→Gly)，318位氨基酸(Leu→Arg)和318位和319位氨基酸同时突变(LeuAla→ArgVal)。活细胞细胞定位显示，转染空载体后，荧光蛋白均匀分布，转染pDsRed-WT(野生型)等，红色荧光蛋白主要分布于细胞质，单点突变、双点突变并不影响该蛋白的细胞质定位，只有N端和C端的该蛋白也可以引导载脂蛋白AV正确定位。细胞爬片固定实验也支持上述的实验结果。结论：成功构建了载脂蛋白AV系列突变体，该蛋白主要在细胞质内定位，基于现有结果可以初步说明载脂蛋白AV在细胞质内发挥重要作用，系列突变体的成功构建为进一步研究不同结构域的功能奠定了良好的基础。