利用Biowalk克隆策略简便高效地构建多基因载体

摘要

DNA片段的重组技术是基因功能研究的重要手段.相对传统聚合基因的方法,构建多基因串联单载体是最优选择.本实验室与武汉伯远生物科技有限公司联合开发的Biowalk克隆技术已获得国家知识产权局授权专利(一种多片段DNA分子组装方法及应用发明专利ZL20130094572.6).Biowalk克隆策略的特点如下:使用Type Ⅱs型限制性内切酶，操作过程实现酶切、连接一步法，既简化了操作，又提高了效率，还做到了无缝连接;所需基础性载体及抗性基因少，两个供给载体、一个接受载体及三种抗性基因;特殊的多克隆位点设计，两种Type Ⅱs型限制性内切酶迭代更替，以达到再利用载体及依次添加目的基因的目的;标准化模块及端口，简化组装规则。相较过去常用的几种克隆策略，此系统具有简便、高效、灵活性好、低成本等优点，能成为新一代构建多基因串联单载体克隆技术。rn 利用Biowalk克隆策略将费氏弧菌的荧光素酶基因luxA,luxB,luxC,luxD,luxE,luxF,luxe七个基因添加到接受载体pBWA(V)H得到约22kb左右的植物转基因载体。农杆菌介导快速转化中花11成熟胚，获得转基因苗;随机挑选24株转基因的苗进行外源基因分子检测，其中17株苗为阳性植株。